猪圆环病毒2型实时荧光定量PCR检测方法的建立

于静; 劳秀杰; 陈彦永; 何小江; 代兵; 赵阿勇; 王晓杜; 宋厚辉

doi:10.11833/j.issn.2095-0756.2016.02.023

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猪圆环病毒2型实时荧光定量PCR检测方法的建立

于静 , 劳秀杰 , 陈彦永 , 何小江 , 代兵 , 赵阿勇 , 王晓杜 , 宋厚辉

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于静, 劳秀杰, 陈彦永, 何小江, 代兵, 赵阿勇, 王晓杜, 宋厚辉. 猪圆环病毒2型实时荧光定量PCR检测方法的建立[J]. 浙江农林大学学报, 2016, 33(2): 357-363. doi: 10.11833/j.issn.2095-0756.2016.02.023

引用本文:

YU Jing, LAO Xiujie, CHEN Yanyong, HE Xiaojiang, DAI Bing, ZHAO Ayong, WANG Xiaodu, SONG Houhui. A real-time PCR method for detection of porcine circovirus 2[J]. Journal of Zhejiang A&F University, 2016, 33(2): 357-363. doi: 10.11833/j.issn.2095-0756.2016.02.023

Citation:

YU Jing, LAO Xiujie, CHEN Yanyong, HE Xiaojiang, DAI Bing, ZHAO Ayong, WANG Xiaodu, SONG Houhui. A real-time PCR method for detection of porcine circovirus 2[J]. Journal of Zhejiang A&F University, 2016, 33(2): 357-363. doi: 10.11833/j.issn.2095-0756.2016.02.023

猪圆环病毒2型实时荧光定量PCR检测方法的建立

doi: 10.11833/j.issn.2095-0756.2016.02.023

1.
浙江农林大学动物科技学院，浙江临安 311300

基金项目:

浙江省科技厅公益项目（2014C32061）;浙江农林大学人才启动项目（2011FR025，2013FR077）;浙江省自然科学基金资助项目（LQ14C010007）;浙江农林大学大学生科技创新训练计划项目（201301017）;浙江农林大学面上基金项目（2013FK001）

详细信息

作者简介: 于静，讲师，博士，从事畜禽遗传与疾病控制研究。

通信作者: 宋厚辉，研究员，博士，从事动物疫病防控和公共卫生研究。

中图分类号: S852.3

A real-time PCR method for detection of porcine circovirus 2

1.
College of Animal Science and Technology, Zhejiang A & F University, Lin’an 311300, Zhejiang, China

Funds:

摘要: 猪圆环病毒2型（porcine circovirus 2, PCV2），是感染猪Sus scrofa domestica的一种单链DNA病毒。建立一种快速、灵敏的检测方法，对于PCV2感染猪的筛选和疾病预防非常重要。根据PCV2 ORF2基因保守区，设计了荧光定量聚合酶链式反应（PCR）引物，利用SYBR Green作为荧光染料建立了一种定量检测PCV2的PCR方法。结果表明：该方法具有灵敏度高、特异性强和重复性好的优点，每微升的最低检测限低至101拷贝DNA。利用该方法对34份PCV2阳性临床样本进行检测，检测符合率为100%，明显高于普通PCR方法的50.0%。因此，本研究建立的PCV2实时荧光定量PCR检测方法为该疾病的预防和控制提供一种有效的检测工具。图4表4参26
- 动物学 /
- 猪 /
- 猪圆环病毒2型 /
- 实时荧光定量PCR
Abstract: To develop an accurate and rapid detection method for disease screening and prevention with porcine circovirus type 2 （PCV2）, a single-strand DNA virus that infects pigs, primers targeted to the ORF2 fragment of the PCV2 conserved region were designed. A real time polymerase chain reaction （PCR） method was developed using SYBR Green as a fluorescent dye and serial dilutions of ORF2 recombinant plasmid to construct a standard curve for an absolute quantification. Results showed that the detection limit was obtained with 101 copy DNA per microliter. This method exhibited 1 000 times higher sensitivity than conventional PCR, only specific identification of PCV2, and better repeatability with the less than 2% variation coefficient of intra- or inter-assay experiments. A total of 34 PCV2 positive clinical samples were confirmed using this real time PCR method, demonstrating 100% agreement in comparison with the conventional PCR having only 50% agreement. This real time PCR method could provide a valuable tool for PCV2 prevention and control.［Ch, 4 fig. 4 tab. 26 ref.］
- zoology /
- porcine /
- porcine circovirus 2 /
- real-time PCR

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链接本文:
https://zlxb.zafu.edu.cn/article/doi/10.11833/j.issn.2095-0756.2016.02.023

https://zlxb.zafu.edu.cn/article/zjnldxxb/2016/2/357

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猪圆环病毒2型实时荧光定量PCR检测方法的建立

doi: 10.11833/j.issn.2095-0756.2016.02.023

1. 浙江农林大学动物科技学院，浙江临安 311300

基金项目:

作者简介:
于静，讲师，博士，从事畜禽遗传与疾病控制研究。

通信作者: 宋厚辉，研究员，博士，从事动物疫病防控和公共卫生研究。

收稿日期: 2015-04-19
修回日期: 2015-04-19
刊出日期: 2016-04-20

中图分类号: S852.3

关键词:

摘要: 猪圆环病毒2型（porcine circovirus 2, PCV2），是感染猪Sus scrofa domestica的一种单链DNA病毒。建立一种快速、灵敏的检测方法，对于PCV2感染猪的筛选和疾病预防非常重要。根据PCV2 ORF2基因保守区，设计了荧光定量聚合酶链式反应（PCR）引物，利用SYBR Green作为荧光染料建立了一种定量检测PCV2的PCR方法。结果表明：该方法具有灵敏度高、特异性强和重复性好的优点，每微升的最低检测限低至101拷贝DNA。利用该方法对34份PCV2阳性临床样本进行检测，检测符合率为100%，明显高于普通PCR方法的50.0%。因此，本研究建立的PCV2实时荧光定量PCR检测方法为该疾病的预防和控制提供一种有效的检测工具。图4表4参26

English Abstract

A real-time PCR method for detection of porcine circovirus 2

1. College of Animal Science and Technology, Zhejiang A & F University, Lin’an 311300, Zhejiang, China

Funds:

Received Date: 2015-04-19
Rev Recd Date: 2015-04-19
Publish Date: 2016-04-20

Keywords:

Abstract: To develop an accurate and rapid detection method for disease screening and prevention with porcine circovirus type 2 （PCV2）, a single-strand DNA virus that infects pigs, primers targeted to the ORF2 fragment of the PCV2 conserved region were designed. A real time polymerase chain reaction （PCR） method was developed using SYBR Green as a fluorescent dye and serial dilutions of ORF2 recombinant plasmid to construct a standard curve for an absolute quantification. Results showed that the detection limit was obtained with 101 copy DNA per microliter. This method exhibited 1 000 times higher sensitivity than conventional PCR, only specific identification of PCV2, and better repeatability with the less than 2% variation coefficient of intra- or inter-assay experiments. A total of 34 PCV2 positive clinical samples were confirmed using this real time PCR method, demonstrating 100% agreement in comparison with the conventional PCR having only 50% agreement. This real time PCR method could provide a valuable tool for PCV2 prevention and control.［Ch, 4 fig. 4 tab. 26 ref.］

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