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辣椒Capscum annuum 为茄科Solanaceae辣椒属Capsicum 1年生或多年生植物[1],是深受喜爱的蔬菜和调味品,也是提炼辣椒素的工业原料,具有重要的经济价值[2]。辣椒果实中的辣椒素类物质能引起辛辣味,主要有辣椒素、二氢辣椒素、降二氢辣椒素、高二氢辣椒素以及高辣椒素等[3-4];其中辣椒素和二氢辣椒素占辣椒素类物质总量的90%左右,也提供了90%以上的辣感和热感[5],是评价辣椒品质的重要指标之一[6]。辣椒素类化合物在辣椒采收期内不断变化。BARBERO等[7]发现:辣椒素在果实发育早期开始积累,随后一直增加,直到果实完全成熟时达到最高,可能受过氧化物酶的降解作用[8],之后略有降低。也有研究认为部分品种果实的辣椒素在采收期内并不会降低[7];辣椒素的积累受生长环境的影响,如在干旱环境下,虽然辣椒产量下降,但辣椒素含量显著提升[9]。而在肥料胁迫条件下,果实的辣椒素含量会增加[10]。采收期内,辣椒果实中维生素C总量呈增长趋势,青熟果中最低,红熟果中最高[11]。不同品种辣椒干物质积累受基因型的控制,随外部环境条件、栽植密度、整枝方式[12]以及后期栽培中肥料使用等因素的变化[13-16]而不尽相同。杭椒(‘杭州鸡爪’‘Hangzhou Jizhua’ב吉林早椒’‘Jilin Zaojiao’)是一种在浙江杭州栽培成功的微辣型辣椒[17],因辣度低,维生素C含量较高,肉质厚,口感好,栽植效益高,栽植规模逐渐扩大[18-19]。随着市场对杭椒需求的不断增加,研究并确定最佳采收期、获得不同辣度杭椒果实等工作意义重大。目前,国内对于杭椒果实辣椒素含量研究较少,尤其是对于其不同采收期辣椒素含量及变化规律的研究几乎空白,关于杭椒果实发育过程中维生素C含量的变化尚未有公开研究报道。本研究以不同采收期杭椒果实中辣椒素类物质、维生素C和干物质相对含量动态变化作为研究内容,旨在确定杭椒果实最佳采收期,为杭椒采收计划制定提供基础理论指导。
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4个杭椒品种‘杭椒12号’‘Hangjiao No.12’、‘杭椒206’‘Hangjiao206’、‘杭椒2号’‘Hangjiao No.2’和‘杭椒2731’‘Hangjiao2731’的果实由杭州市农业科学研究院提供。选择不同采收期大小均匀、无机械损伤、成熟度一致的杭椒果实进行采收。
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各品种杭椒在开花后14、21、28、35、42、49、56 d进行采收。果实采收后冲洗擦干,去梗后对半剖开,放入塑料网袋,浸没于液氮中预冻15~30 s,放入真空冷冻干燥机(Christ Beta 1-8 LD,德国Christ公司)中冷冻干燥,粉碎,过50目筛,置于−20 ℃冰箱中暂存待用。
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辣椒素和二氢辣椒素参考GB/T 21266−2007《辣椒及辣椒制品中辣椒素类物质测定及辣度表示方法》[20]改良优化后测定,通过加标回收实验确定方法可行性。绘制辣椒素和二氢辣椒素标品的高效液相色谱(HPLC)图谱(图1A)。
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精确称取杭椒粉末2.000 0 g,置于10 mL离心管中,加入4 mL甲醇(色谱纯,美国TEDIA公司)-四氢呋喃(色谱纯,美国TEDIA公司) (体积比为1∶1)溶液,振荡混匀,40 kHz下超声提取20 min,10 000 r·min−1离心10 min,转移上清液;所得沉淀再用3 mL甲醇-四氢呋喃溶液提取2次,离心后将上清液合并,并用甲醇-四氢呋喃溶液定容。随后将所得溶液置于(60.0±0.5) ℃恒温水浴中浓缩至2 mL,过0.45 μm微孔滤膜待用。
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采用外标法用高效液相色谱仪(安捷伦1200,美国Agilent公司)测定并分析提取液中的辣椒素和二氢辣椒素。色谱柱(250.0 mm×4.6 mm,5 μm,Hypersil ODS2,大连伊利特)柱温30 ℃;设定紫外检测器波长280 nm;流动相选用体积分数为80%的甲醇,流速0.8 mL·min−1;进样量10 μL。绘制杭椒样品HPLC图谱(图1A)。
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称取2.000 0 g杭椒冻干样品,加入1.000 0 g·L−1辣椒素标准溶液150 μL,按照1.3.1方法提取,重复5次取平均值;同时称取3份2.000 0 g相同的杭椒冻干样品用作平行分析。称取2.000 0 g杭椒冻干样品,加入1.000 0 g·L−1二氢辣椒素标准溶液120 μL,按照1.3.1方法提取,重复5次取平均值;同时称取3份2.000 0 g相同的杭椒冻干样品用作平行分析。
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参考GB/T 21266−2007《辣椒及辣椒制品中辣椒素类物质测定及辣度表示方法》[20],计算干样中辣椒素质量分数(mg·g−1):W辣椒素=C1V/m;二氢辣椒素质量分数(mg·g−1):W二氢辣椒素=C2V/m;辣椒素类物质总量(mg·g−1):W总=(W辣椒素+W二氢辣椒素)/0.9。其中:C1、C2分别为标准曲线上对应的辣椒素和二氢辣椒素质量浓度(g·L−1);V为样品浓缩后体积(mL),m为干样质量(g),0.9为辣椒素与二氢辣椒素折算为辣椒素类物质总量的系数。
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杭椒果实采收后,清洗擦干,用电子天平称得鲜样质量;随后用真空冷冻干燥机冷冻干燥至恒质量即为样品干样质量。果实干物质相对含量=干样质量/鲜样质量×100%。
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参考GB/T 21266−2007《辣椒及辣椒制品中辣椒素类物质测定及辣度表示方法》[20],计算杭椒斯科维尔指数(SHU):X=Wf×0.9×(16.1×103)+Wf×0.1×(9.3×103)。其中Wf为鲜样中辣椒素类物质质量分数(mg·g−1);0.9为辣椒素类物质总量的折算系数;16.1×103为辣椒素或二氢辣椒素转换为斯科维尔指数的系数;0.1为其余辣椒素类物质含量的折算系数;9.3×103为其余辣椒素类物质转换斯科维尔指数的系数。斯科维尔指数与辣度的换算关系为:150 SHU=1度。辣度四舍五入取整数。
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采用Excel 2007整理数据,使用SPSS 22.0进行显著性分析,使用Origin 2018作图。
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将配制好的不同浓度梯度的辣椒素和二氢辣椒素混合标样,高效液相色谱仪检测,用纵坐标(y)表示峰面积(mAU·s),用横坐标(x)表示质量浓度(g·L−1),得到辣椒素和二氢辣椒素的回归方程和相关系数(表1)。
表 1 2种辣椒素的回归方程、相关系数
Table 1. Regression equation and correlation of two capsaicinoids
组分 回归方程 相关系数 辣椒素 y=8 745.4x+17.858 0.999 8 二氢辣椒素 y=5 795.5x+13.288 0.999 8 说明:y表示峰面积,x表示质量浓度 -
平行分析可知:样品辣椒素平均值为0.065 0 mg·g−1,二氢辣椒素平均值为0.067 5 mg·g−1。加标回收结果显示:2种辣椒素组分平均回收率为99.186%~99.580%,相对标准误为1.076%~1.562%(表2)。说明加标回收方法重复性好,准确度高。
表 2 2种辣椒素类物质成分加标回收率
Table 2. Recovery of two capsaicinoids
组分 样品质量/mg 加标量/mg 测得量/mg 回收率/% 辣椒素 0.130±0.005 0.150 0.278±0.002 99.186±1.076 二氢辣椒素 0.135±0.003 0.120 0.255±0.002 99.580±1.562 说明:数据为平均值±标准误(n=5) -
由表3可以看出:采收期内不同品种干物质相对含量不同。花后14~28 d,‘杭椒2号’果实干物质相对含量稳定,花后28~49 d,干物质迅速增加,之后增速变缓,花后56 d时达到最大值(14.452%)。‘杭椒2731’果实干物质相对含量在花后14~35 d波动不大,35~42 d和49~56 d迅速增加,花后56 d时达到最大值(13.598%)。‘杭椒206’果实干物质相对含量在花后21~42 d缓慢增加,42~49 d迅速增加,花后56 d达最大值(12.553%)。‘杭椒12号’果实在花后14~28 d干物质相对含量稳定,之后平稳增加,56 d时达最大值(13.571%)。
表 3 4个杭椒品种果实在采收期内的干物质相对含量
Table 3. Content of dry matter in fruits of four Hangzhou pepper cultivars during harvest period
花后时间/d 干物质相对含量/% ‘杭椒12号’ ‘杭椒2号’ ‘杭椒206’ ‘杭椒2731’ 14 7.618±0.392 e 9.015±0.675 d 7.901±0.675 d 8.937±0.420 c 21 7.836±0.189 e 8.391±0.056 d 7.969±0.271 d 8.061±0.149 c 28 8.350±0.217 e 8.352±0.228 d 8.531±0.409 cd 9.052±0.241 c 35 9.365±0.073 d 10.361±0.050 c 9.458±0.302 bc 9.123±0.810 c 42 10.171±0.082 c 12.110±0.309 b 10.095±0.261 b 10.987±0.026 b 49 12.259±0.383 b 14.164±0.070 a 12.023±0.199 a 11.223±0.099 b 56 13.571±0.081 a 14.452±0.070 a 12.553±0.338 a 13.598±0.055 a 说明:数据为平均值±标准误(n=3)。同列不同小写字母表示差异显著(P<0.05) -
由图2可以看出:4种杭椒果实辣椒素类物质总量在采收期内变化趋势不同。花后14 d,4个品种辣椒素类物质总量均较低。14~21 d,‘杭椒2号’辣椒素类物质迅速增长,28 d时达到最大值(2.520 0 mg·g−1),随后开始下降。‘杭椒12号’辣椒素类物质总体呈增长趋势,花后21 d迅速增长至0.600 0 mg·g−1,之后变化较小,56 d时达最大(0.880 0 mg·g−1)。‘杭椒2731’辣椒素类物质在花后14~49 d呈增加趋势,之后下降。‘杭椒206’在整个采收期均处于较低水平。
图 2 采收期4个品种辣椒素类物质总量及变化
Figure 2. Content of capsaicinoids in four Hangzhou pepper cultivars during the harvest period
辣度作为直观呈现果实辣感的一项指标,有助于消费者选择合适品种。由图3可以看出:4个杭椒品种辣度大小依次为‘杭椒2号’‘杭椒12号’‘杭椒2731’‘杭椒206’,采收期内其变化趋势与辣椒素类物质变化总体一致。比较图2和图3发现:‘杭椒2号’辣度变化曲线与辣椒素类物质总量变化曲线存在较大差异,这是由于辣度还与果实内辣椒素类物质质量和干物质质量有关;采收期内‘杭椒2号’鲜果中干物质相对含量增加迅速,而干物质中辣椒素类物质质量分数变化不大,造成单位质量鲜果中辣椒素类物质总量较高,因而鲜果辣度较高。
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由图4可以看出:采收期内,4个杭椒品种维生素C质量分数呈增长趋势。其中‘杭椒2号’在花后14~35 d平稳增加,35 d后趋于稳定,至56 d时达最大(12.220 0 mg·g−1)。‘杭椒2731’在花后14~49 d呈增长趋势,49 d后趋于稳定,56 d时达最大值(12.660 0 mg·g−1)。‘杭椒206’在花后14~21 d变化较小,21~28 d迅速增加,35 d后趋于稳定,56 d时达最大值(12.620 0 mg·g−1)。‘杭椒12号’在整个采收期内平稳增加,花后49 d达最大值(11.940 0 mg·g−1)。总的来说,采收期内4个杭椒品种果实维生素C质量分数动态变化与大部分辣椒品种基本相同[22-23]。
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4个杭椒品种维生素C质量分数和干物质相对含量在采收期内均随果实成熟度的增加而升高,但是辣椒素类物质总量和辣度在采收期内的变化差异较大。花后14 d,辣椒素类物质合成相关的基因还未开始表达[24],各品种辣椒素类物质和辣度均处于较低水平。‘杭椒12号’和‘杭椒2号’一样,果实辣椒素类物质均在花后14~21 d迅速增加,不同的是‘杭椒12号’在49~56 d时再次迅速增加至高点(0.880 0 mg·g−1),由此推断该品种可能是晚熟品种。‘杭椒2731’果实辣椒素类物质在花后28 d前一直处于较低水平,28 d后略有上升,42~49 d迅速增加并达到最大值(0.520 0 mg·g−1);而‘杭椒206’果实在整个采收期内均处于较低水平(0.037 0~0.120 0 mg·g−1)。从整体上看,4个辣椒品种中‘杭椒2号’的辣度最高,‘杭椒206’的辣度最低。辣椒素类物质的合成积累受多方面因素影响[24]。一方面,辣椒素类物质的合成积累与辣椒素合成基因的表达有关,KEYHANINEJAD等[25]发现辣椒素合成途径中关键基因在花后16~20 d强表达,使得采收期内辣椒素类物质呈先升高后降低的趋势;另一方面辣椒素类物质快速增加和达到高峰的时期还与品种有关[26],同时受到环境因素的影响[27]。
综上所述,不同杭椒品种在采收期内辣椒素类物质变化差异较大,采收时需要根据不同品种生长特性,同时结合市场需求制定不同采收计划。对‘杭椒2号’(相对高辣品种)而言,花后49 d时辣椒素类物质质量分数较高,果实辣感最强,此时采收能获得成熟度合适、干物质相对含量和维生素C质量分数较高的果实。‘杭椒12号’(相对中辣品种)于花后56 d辣椒素类物质质量分数达到高值,辣感最强,维生素C质量分数和干物质相对含量也较高,但此时果实过于成熟,不利于长途运输和储存,因当根据实际情况进行果实采收。‘杭椒206’和‘杭椒2731’属于相对低辣品种,整个采收期辣椒素类物质均较低,辣感弱,结合维生素C质量分数和干物质相对含量变化,此2品种的最适采收期为花后49 d,此时果实成熟度好,有利于储存和运输。
Dynamic changes of capsaicinoids and vitamin C contents in Hangzhou pepper during the harvesting period
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摘要:
目的 研究杭椒Capsicum annuum ‘Hangzhou Jizhua’בJilin Zaojiao’果实辣椒素、维生素C等物质在采收期的动态变化,以确定最佳采收期。 方法 选取4个常见杭椒品种,采用高效液相色谱法分别测定开花后14、21、28、35、42、49、56 d采收的果实中辣椒素、二氢辣椒素和维生素C以及干物质质量分数。 结果 采收期内4个杭椒品种果实辣椒素类物质质量分数不同,品种间差异显著(P<0.05);维生素C质量分数和干物质相对含量随果实成熟度增加而升高。 结论 花后49 d是杭椒果实最佳采收期,此时果实成熟度好,辣椒素类物质、维生素C质量分数和干物质相对含量均较高。采收期内不同品种辣椒素类物质质量变化差异大,具体采收计划应综合种植品种、市场需求和供求关系等多方面因素考虑。图4表3参27 Abstract:Objective This study is aimed to determine the dynamic changes of capsaicinoids, vitamin C and dry matter contents in the fruit of Hangzhou pepper (Capsicum annuum ‘Hangzhou Jizhua’בJilin Zaojiao’) during the harvest period. Method Contents of capsaicin, dihydrocapsaicin, vitamin C and dry matter in the fruit of four common cultivars of Hangzhou pepper harvested at different times (14, 21, 28, 35, 42, 49, 56 days after flowering) were measured by HPLC. Result Content of capsaicinoids fluctuated during the harvest period and varied among four cultivars, while the contents of vitamin C and dry matter increased with fruit ripening. Conclusion Around 49 days after flowering is the best pepper harvest time in terms of fruit maturity, and the contents of capsaicinoids, vitamin C and dry matter. Since the dynamic changes of capsaicinoids content varied among cultivars, the optimum harvesting planning should take into consideration various factors such as pepper varieties, market demand and supply-demand relationship. [Ch, 4 fig. 3 tab. 27 ref.] -
Key words:
- Hangzhou pepper /
- harvest period /
- capsaicinoids /
- vitamin C /
- dry matter /
- dynamic change
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绿色植物通过光合作用固定二氧化碳(CO2)并转变成有机物质的过程被称为植物碳汇[1−2],是降低大气中CO2浓度最主要的途径。但受到植物呼吸消耗、微生物分解和环境条件变化的影响,绝大部分被固定的碳都无法长期稳定存在[1]。植硅体(phytolith)是植物在生长过程中,通过根系吸收的无定型硅酸[Si(OH)4]经维管束输送后在植物细胞内腔或细胞间隙中形成的硅包碳化合物,几乎存在于所有植物体中,在竹亚科Bambusoideae植物中植硅体尤其丰富[3−4]。植硅体碳是在植硅体形成过程中被封存于植硅体内的有机碳[5],随植物体死亡分解进入土壤后,可以稳定存在数千年甚至上万年之久[6−7],成为陆地土壤长期碳封存的重要机制之一。这种长期的生物地球化学碳封存形式被认为在减少大气CO2,缓解温室效应方面具有很大的潜力[8]。
毛竹Phyllostachys edulis已被证明是一种植硅体碳汇能力很强的植物[6−8],在中国广泛分布。在毛竹的经营管理过程中一直有施用氮肥的习惯,氮肥的施用直接促进毛竹的光合作用,进而提高单位面积毛竹笋材产量。研究表明:在毛竹的生长过程中除了氮素以外,对硅也有很强的富集能力[9−10],而毛竹体内硅、植硅体及植硅体碳的质量分数具有极显著的相关关系[11]。氮施用后虽然增强了毛竹光合能力[12],但对硅的吸收利用以及毛竹植硅体碳汇能力的影响还需进一步探索。
本研究以毛竹为研究对象,开展氮、硅二因素三水平栽培试验,采集毛竹不同器官,并测定不同器官硅、植硅体和植硅体碳质量分数,以明确不同器官对外源氮、硅添加的响应,揭示外源氮、硅添加对毛竹植硅体碳汇的影响机理,为提升中国竹林生态系统植硅体碳汇能力提供参考。
1. 试验设计与方法
1.1 试验设计
本研究设计为氮、硅二因素三水平盆栽试验。具体设计见表1。
表 1 试验设计及氮、硅用量Table 1 Experimental design and N, Si application rate处理 尿素/
(mg·kg−1)硅酸钠/
(mg·kg−1)处理 尿素/
(mg·kg−1)硅酸钠/
(mg·kg−1)处理 尿素/
(mg·kg−1)硅酸钠/
(mg·kg−1)N0Si0 0 0 N1Si0 250 0 N2Si0 500 0 N0Si1 0 75 N1Si1 250 75 N2Si1 500 75 N0Si2 0 150 N1Si2 250 150 N2Si2 500 150 说明:氮和硅用量按照生产上常规施肥量,即尿素750和225 kg·hm−2,有效土层深度30 cm,容重1.01 g·cm−3计算。 试验盆栽栽培于福州市晋安区新店镇福建省林业科学研究院苗圃(26°09′05″N,119°17′03″E,海拔为103.8 m)。试验栽培容器长、宽、高分别为30、20、30 cm,距容器底部2 cm侧面设直径为0.5 cm的小孔,保证排水通气。栽培用土壤来源于福州市闽侯县三叠井森林公园自然分布毛竹林。挖取土壤前清除地表植被和凋落物,挖取0~30 cm土层土壤,挑除石子、动植物残体后于干燥通风处晾干,过2 mm筛后备用。土壤容重为1.01 g·cm−3,土壤有机质为20.3 g·kg−1,土壤pH为5.51,土壤碱解氮、有效磷、速效钾、有效硅质量分数分别为245.00、2.93、116.60、54.10 mg·kg−1。
试验用毛竹苗来源于四川峨眉廷富育苗有限公司培育的毛竹1年生袋装实生幼苗,种源为广西桂林。栽培时竹苗呈丛状分生,4~5株·丛−1,蔸部具完整根鞭,苗高30 cm左右,生长健壮,无病虫害。栽培之前将每片竹叶剪去60%,以降低蒸腾速率,增加成活率。
每盆置风干土10.0 kg,浅栽生长均匀的幼苗4株,浇透水,至容器侧面小孔有水溢出,再取10.0 kg风干土均匀铺盖于湿土之上,保湿保水防结块,置于通风防雨透光玻璃温室中培养。栽培期间17:00浇水1次,浇水量为当地前10 a平均日降雨量。
1.2 样品采集
竹苗生长的过程中定时定量浇水,分别收集不同处理凋落物,及时烘干储存。毛竹苗生长2 a后,采用全株采集法采集每盆毛竹样品,清洗干净后分不同器官烘干储存备用。
1.3 样品分析
不同处理和不同器官毛竹样品在分析测定前进行粉碎(<0.5 mm)。样品植硅体的提取采用微波消解法,之后用0.800 0 mol · L−1重铬酸钾溶液对植硅体进行检验,确保植硅体表面有机物质完全被去除,提取后的植硅体于65 ℃烘箱中烘干48 h,称量[13]。植硅体碳采用碱溶分光光度法测定[14],在样品测定的同时加入植物标准样(GBW07602)对测定的准确性进行检验。每个样品重复3次。样品总硅采用偏硼酸锂熔融-比色法测定[15],样品碳和氮采用碳氮元素分析仪测定。
1.4 数据处理与统计
使用SPSS 18.0进行数据统计分析,Duncan新复极差法测验不同处理的差异显著性,Origin 8.5作图。植硅体质量分数(g·kg−1)=植硅体质量(g)/样品干质量(kg),植硅体碳质量分数(g·kg−1) =植硅体碳质量(g)/样品干质量(kg)。
2. 结果与分析
2.1 毛竹不同器官硅、植硅体、植硅体碳、碳和氮质量分数
由表2可知:在毛竹不同器官及凋落物中,硅、植硅体和植硅体碳质量分数从高到低依次均为凋落物、叶、枝、篼、秆,变化范围分别为2.2~78.4、1.9~151.9和0.78~3.93 g·kg−1。与硅、植硅体和植硅体碳不同,碳质量分数在毛竹不同器官及凋落物中从高到低依次为秆、叶、篼、枝、凋落物,变化范围为372.0~466.0 g·kg−1。不同器官及凋落物氮质量分数则表现为毛竹叶中最高,为18.8 g·kg−1,凋落物最低,为4.4 g·kg−1。差异显著性分析结果表明:凋落物中硅和植硅体质量分数均显著高于其他器官(P<0.05),且植硅体质量分数在枝、秆和篼之间均具有显著差异(P<0.05),而硅质量分数在枝、秆和篼之间不具有显著差异。与植硅体相似,植硅体碳在枝、秆和篼之间具有显著差异(P<0.05),但植硅体碳质量分数在凋落物和叶之间不具有显著差异。碳质量分数除了在叶和篼之间不具有显著差异外,在其他器官及凋落物之间均具有显著差异(P<0.05)。氮质量分数在不同器官之间均具有显著差异(P<0.05),但在凋落物中没有表现出显著低于枝的现象。
表 2 毛竹不同器官和凋落物硅、植硅体、植硅体碳、碳和氮质量分数Table 2 Content of Si, phytolith, PhytOC, C and N in different organs and litterfall of Ph. edulis样品 硅/(g·kg−1) 植硅体/(g·kg−1) 植硅体碳/(g·kg−1) 碳/(g·kg−1) 氮/(g·kg−1) 叶 26.8±2.8 b 42.3±3.8 b 3.78±0.17 a 452±4 b 18.8±0.9 a 枝 6.7±0.3 c 22.1±1.0 c 2.84±0.19 b 439±1 c 5.8±0.3 d 秆 2.2±0.1 c 1.9±0.1 e 0.78±0.10 d 466±1 a 7.7±0.6 c 篼 5.2±0.4 c 11.7±0.8 d 1.55±0.13 c 448±2 b 11.8±0.3 b 凋落物 78.4±2.8 a 151.9±3.4 a 3.93±0.15 a 372±4 d 4.4±0.2 d 说明:数据为平均值±标准误。不同小写字母表示不同器官间差异显著 (P<0.05)。 2.2 不同处理硅、植硅体、植硅体碳、碳和氮质量分数
由表3可知:毛竹叶、枝、秆、篼硅质量分数均表现为N0Si2处理最高,分别为42.2、8.4、2.9和6.6 g·kg−1,处理N2Si0最低,分别为18.4、5.6、1.8和3.5 g·kg−1。差异显著性分析结果表明: N0Si2和N0Si1处理叶硅质量分数显著高于除N0Si0处理以外的所有处理(P<0.05),而枝、秆和篼硅质量分数在不同处理之间均无显著差异。与叶、枝、秆、篼不同,凋落物硅质量分数表现为N2Si2处理最高,为91.8 g·kg−1,在N0Si0处理中最低,仅为60.9 g·kg−1。差异显著性分析结果表明: N2Si2处理中硅质量分数显著高于N0Si1和N0Si0处理(P<0.05),凋落物硅质量分数在其他处理间均不具有显著差异。
表 3 各处理毛竹不同器官和凋落物硅质量分数Table 3 Contents of Si in different organs and litterfall of Ph. edulis under different treatments处理 各处理毛竹不同部位硅质量分数/(g·kg−1) 叶 枝 秆 篼 凋落物 N0Si0 33.1±4.7 ab 6.1±3.0 a 2.3±1.0 a 3.7±0.7 a 60.9±5.3 c N0Si1 36.5±2.8 a 6.8±0.4 a 2.3±0.4 a 5.7±1.6 a 74.1±2.2 bc N0Si2 42.2±2.1 a 8.4±0.3 a 2.9±0.2 a 6.6±0.3 a 78.9±7.0 ab N1Si0 20.0±2.5 c 5.9±2.8 a 2.0±0.5 a 3.5±0.8 a 77.0±2.1 ab N1Si1 24.3±2.4 bc 6.2±0.5 a 2.1±0.5 a 5.4±0.2 a 77.2±2.9 ab N1Si2 24.4±1.2 bc 8.0±1.1 a 2.5±0.6 a 6.3±0.1 a 79.2±1.7 ab N2Si0 18.4±3.8 c 5.6±1.5 a 1.8±0.2 a 3.5±0.7 a 80.3±0.3 ab N2Si1 20.3±1.5 c 5.9±0.2 a 1.9±0.4 a 5.6±2.2 a 86.1±1.7 ab N2Si2 21.9±1.9 c 7.5±0.9 a 2.4±0.2 a 6.3±0.8 a 91.8±9.3 a 说明:数据为平均值±标准误。不同小写字母表示不同处理间差异显著(P<0.05)。 由表4可知:随着硅添加量的增加,大部分处理植硅体质量分数呈增加的趋势。具体来看,不同处理毛竹叶植硅体质量分数为30.3~59.5 g·kg−1,其中N0Si2处理叶植硅体质量分数最高,N2Si0处理最低。N2Si2处理枝植硅体质量分数最高,为26.6 g·kg−1, N1Si0处理最低,仅为18.6 g·kg−1。不同处理秆和篼植硅体质量分数变化规律较为一致,均表现为N2Si2处理最高,分别为2.2和14.9 g·kg−1, N0Si0处理最低,分别为1.6和9.1 g·kg−1。N0Si2处理凋落物植硅体质量分数最高,为169.5 g·kg−1,比N1Si0处理高24.3%。差异显著性分析结果表明:仅叶中植硅体质量分数在N0Si0、N0Si1、N0Si2处理与其他处理间具有显著差异(P<0.05)。
表 4 各处理毛竹不同器官和凋落物植硅体质量分数Table 4 Contents of phytolith in different organs and litterfall of Ph. edulis under different treatments处理 各处理毛竹不同部位植硅体质量分数/(g·kg−1) 叶 枝 秆 篼 凋落物 N0Si0 51.8±7.8 a 19.8±3.3 a 1.6±0.1 a 9.1±2.8 a 156.6±23.0 a N0Si1 59.2±2.3 a 20.6±4.0 a 1.9±0.4 a 9.5±0.2 a 160.8±10.4 a N0Si2 59.5±2.8 a 24.2±4.3 a 2.0±0.2 a 14.0±4.7 a 169.5±3.8 a N1Si0 35.4±1.2 b 18.6±2.4 a 1.8±0.1 a 10.1±2.8 a 136.4±19.5 a N1Si1 35.7±0.9 b 20.8±2.2 a 1.9±0.5 a 12.3±0.8 a 154.6±9.9 a N1Si2 37.8±0.9 b 26.2±3.3 a 2.1±0.5 a 14.7±0.2 a 155.3±6.4 a N2Si0 30.3±0.2 b 20.7±2.5 a 1.9±0.1 a 10.1±2.2 a 144.3±15.6 a N2Si1 34.4±3.0 b 21.1±1.9 a 2.0±0.3 a 11.0±1.7 a 144.7±0.7 a N2Si2 36.3±1.9 b 26.6±5.1 a 2.2±0.2 a 14.9±1.7 a 144.7±28.7 a 说明:数据为平均值±标准误。不同小写字母表示不同处理间差异显著(P<0.05)。 由表5可知:毛竹不同器官植硅体碳质量分数在不同处理之间差异较小。总体来看,随着硅添加量的增加,不同器官及凋落物植硅体碳质量分数均具有上升趋势。不同处理叶、枝、秆、篼及凋落物植硅体碳质量分数分别为3.15~4.68、2.10~3.47、0.30~1.18、1.09~2.15和3.21~4.63 g·kg−1,均表现为N2Si2处理最高, N0Si0处理最低,表明氮和硅的添加能够促进植硅体碳质量分数增加。差异显著性分析结果表明:仅秆植硅体碳质量分数在N0Si1和N0Si0与N2Si2处理间具有显著差异(P<0.05)。
表 5 各处理毛竹不同器官和凋落物植硅体碳质量分数Table 5 Contents of PhytOC in different organs and litterfall of Ph. edulis under different treatments处理 各处理毛竹不同部位植硅体碳质量分数/(g·kg−1) 叶 枝 秆 篼 凋落物 N0Si0 3.15±0.24 a 2.10±0.56 a 0.30±0.04 c 1.09±0.22 a 3.21±0.81 a N0Si1 3.20±1.05 a 2.25±0.66 a 0.39±0.10 bc 1.11±0.07 a 3.83±0.92 a N0Si2 3.82±0.55 a 3.12±0.63 a 0.61±0.40 abc 1.54±0.50 a 4.14±2.25 a N1Si0 3.59±0.67 a 2.28±0.59 a 0.70±0.33 abc 1.13±0.47 a 3.52±0.67 a N1Si1 4.01±0.12 a 3.10±0.54 a 0.91±0.13 abc 1.77±0.51 a 3.73±1.05 a N1Si2 4.31±0.98 a 3.38±0.46 a 1.06±0.14 ab 1.79±0.32 a 4.46±0.20 a N2Si0 3.63±1.17 a 2.45±1.28 a 0.86±0.19 abc 1.58±0.18 a 3.81±0.51 a N2Si1 4.05±0.20 a 3.39±0.28 a 1.00±0.27 abc 1.84±0.62 a 4.01±0.17 a N2Si2 4.68±0.41 a 3.47±0.98 a 1.18±0.05 a 2.15±0.33 a 4.63±1.60 a 说明:数据为平均值±标准误。不同小写字母表示不同处理间差异显著(P<0.05)。 由表6可知:与植硅体碳质量分数相似,毛竹不同器官碳质量分数在不同处理间差异均较小并具有随着氮添加量增加不断增加,随着硅添加量的增加不断降低的趋势。不同处理叶、枝、秆、篼碳质量分数分别为436~478、436~441、462~471和441~456 g·kg−1,可知叶碳质量分数在不同处理之间差异最大。不同处理凋落物碳质量分数随氮和硅添加量的增加均不断增加,为348~387 g·kg−1。差异显著性分析结果表明: N2Si1处理叶碳质量分数显著高于其他处理,N0Si2处理枝碳质量分数显著低于N1Si0处理, N1Si0处理和N2Si0处理秆碳质量分数显著高于除N2Si1处理以外的其他处理, N2Si2处理凋落物碳质量分数显著高于N0Si0处理(P<0.05)。
表 6 各处理毛竹不同器官和凋落物碳质量分数Table 6 Contents of C in different organs and litterfall of Ph. edulis under different treatments处理 各处理毛竹不同部位碳质量分数/(g·kg−1) 叶 枝 秆 篼 凋落物 N0Si0 440±2 b 440±3 ab 463±2 b 443±5 b 348±17 b N0Si1 439±2 b 437±3 ab 463±2 b 442±3 b 372±6 ab N0Si2 436±3 b 435±2 b 462±2 b 441±4 b 376±5 ab N1Si0 453±2 b 442±2 a 471±0 a 452±3 ab 365±11 ab N1Si1 453±2 b 439±1 ab 466±2 b 450±5 ab 368±14 ab N1Si2 453±3 b 438±3 ab 465±1 b 449±4 ab 369±3 ab N2Si0 454±4 b 441±1 ab 471±2 a 456±1 a 381±16 ab N2Si1 478±21 a 441±1 ab 467±0 ab 451±4 ab 384±2 ab N2Si2 459±4 ab 439±2 ab 465±1 b 449±2 ab 387±11 a 说明:数据为平均值±标准误。不同小写字母表示不同处理间差异显著(P<0.05)。 由表7可知:毛竹不同器官氮质量分数在不同处理之间差异均较大,叶、枝、秆、篼和凋落物氮质量分数最低的处理分别为N0Si1、N0Si2、N0Si1、N0Si0和N0Si1处理,其氮质量分数分别为14.5、4.3、5.0、10.0和3.4 g·kg−1;最高的处理分别为N2Si1、N2Si0、N1Si2、N2Si0和N2Si0处理,比最低值分别增加54.5%、79.1%、90.0%、29.0%和50.0%。差异显著性分析结果表明:叶、枝、秆、篼和凋落物氮质量分数在不同处理间变化规律均不明显,氮质量分数在部分处理间存在显著差异(P<0.05)。
表 7 各处理毛竹不同器官和凋落物氮质量分数Table 7 Contents of N in different organs and litterfall of Ph. edulis under different treatments处理 各处理毛竹不同部位氮质量分数/(g·kg−1) 叶 枝 秆 篼 凋落物 N0Si0 16.9±0.8 cde 5.4±0.9 bcd 6.5±1.0 abc 10.0±0.2 b 3.4±0.1 c N0Si1 14.5±0.9 e 4.6±0.1 cd 5.0±0.3 c 10.7±0.3 b 3.6±0.1 bc N0Si2 15.7±0.9 de 4.3±0.1 d 5.6±0.2 bc 10.8±0.1 b 3.4±0.1 c N1Si0 19.1±1.0 bc 6.3±0.6 abc 8.7±1.6 ab 12.3±0.2 ab 4.4±0.2 ab N1Si1 20.8±0.8 ab 6.1±0.2 abcd 8.6±0.6 abc 12.4±0.8 ab 4.8±0.3 a N1Si2 18.4±1.0 bcd 5.4±0.3 bcd 9.5±0.1 a 12.1±0.3 ab 4.8±0.3 a N2Si0 20.9±1.1 ab 7.7±0.7 a 9.3±2.2 a 12.9±1.1 a 5.1±0.4 a N2Si1 22.4±0.4 a 6.7±1.0 ab 7.7±0.8 abc 12.3±0.4 ab 5.1±0.6 a N2Si2 20.2±0.6 ab 5.8±0.5 abcd 8.4±1.3 abc 12.6±0.2 a 4.7±0.1 a 说明:数据为平均值±标准误。不同小写字母表示不同处理间差异显著(P<0.05)。 2.3 毛竹硅、植硅体、植硅体碳、碳和氮质量分数之间的相关关系
相关性分析结果(表8)表明:毛竹硅与植硅体、植硅体与植硅体碳以及硅与植硅体碳质量分数之间均存在极显著正相关关系(P<0.01),硅与氮质量分数之间存在极显著二次相关关系(P<0.01),植硅体碳与碳质量分数之间存在极显著负相关关系(P<0.01)。
表 8 毛竹硅、植硅体、植硅体碳、碳和氮质量分数之间的相关关系Table 8 Correlation between Si and phytolith, phytolith and PhytOC, Si and PhytOC, Si and N, C and PhytOC contents of Ph. edulisx y 拟合方程 决定系数(R2) 显著性水平 植硅体 硅 y = 0.088 + 0.517x 0.958 4 P<0.001 植硅体 植硅体碳 y = 1.839 + 0.016x 0.463 2 P<0.001 硅 植硅体碳 y = 1.837 + 0.031x 0.481 8 P<0.001 硅 氮 y = 7.004 + 0.507x−0.007x2 0.493 3 P<0.001 碳 植硅体碳 y = 472.8−14.5x 0.318 3 P<0.001 2.4 植硅体、植硅体碳与碳质量分数的氮-硅交互作用
交互作用分析结果表明:对于毛竹植硅体、植硅体碳与碳质量分数来说,氮与硅之间均不存在交互作用的显著性(表9)。
表 9 植硅体、植硅体碳与碳质量分数的氮-硅交互作用Table 9 Interaction between N and Si for phytolith, PhytOC, and C contents指标 自由度 均方 F 显著性水平 $ {\eta }_{p}^{2} $ 植硅体 4 15.858 0.005 1.000 0.000 植硅体碳 4 0.069 0.030 0.998 0.001 碳 4 0.555 0.044 0.996 0.001 说明:$ {\eta }_{p}^{2} $表示植硅体和植硅体碳分别对组间变异的贡献率。 2.5 毛竹不同器官植硅体碳占总碳比
由图1可知:毛竹叶、枝、秆、篼和凋落物中植硅体碳占总碳的比例分别为5.7%~8.6%、4.8%~7.9%、0.7%~2.5%、2.5%~4.8%和9.2%~12.1%。与不同器官相比,凋落物中植硅体碳占总碳的比例平均最高,为10.5%。不同处理凋落物之间,N1Si2处理植硅体碳占总碳的比例最高,N0Si0处理最低。不同器官之间,不同处理植硅体碳占总碳的比例从高到低依次为叶、枝、篼、秆,平均分别为6.9%、6.5%、3.5%和1.7%。同一器官不同处理之间,在同一氮添加水平下随着硅添加量的增加,植硅体碳占总碳的比例不断升高。
3. 讨论
3.1 毛竹植硅体、植硅体碳的形成与硅密切相关
硅是地壳中第二大元素,其蕴藏量仅次于氧,在地球化学碳循环中起着重要的作用[16]。研究表明:植物对硅的吸收利用分为对单硅酸的跨膜吸收和沿维管束的运输2个过程,其中植物对硅的吸收能力取决于土壤溶液中单硅酸的浓度和植物根系硅转运蛋白的表达量[17]。动力学研究表明:外部单硅酸浓度的升高能够有效促进其以被动扩散或主动运输的形式被跨膜吸收[18−19]。土壤中的有效硅到达植物根部后才能开始随蒸腾流沿着维管束运输的第2个过程,并且具有边运输边形成聚合硅酸的能力[20],最终在植物组织的蒸腾末端沉积,形成稳定的无定型二氧化硅颗粒,表明植物对硅的吸收利用最终依赖于特异性硅转运蛋白和蒸腾作用。
植硅体在植物抗寒、抗逆等方面[4, 21]具有重要的作用。硅被植物吸收后主要以植硅体的形式存在于植物体内,因此植物体内植硅体质量分数取决于植物吸收利用硅的能力。本研究中毛竹不同器官之间硅与植硅体质量分数差异较大,但表现出相同的变化规律和极显著相关关系,表明毛竹不同器官对硅利用的能力不同,也表明了硅与植硅体之间存在的密切联系。这与ZUO等[22]对黍Panicum miliaceum、粟Setaria italica的研究,LI等[23]对湿地芦苇Phragmites australis的研究,PARR等[24]对竹林的研究及SONG等[25]对中国草原植被的研究结果相同,证明了植物体中植硅体质量分数明显受植物对硅富集能力的影响。
植硅体碳形成于植硅体积淀的过程中。LI等[26]在对白洋淀芦苇的研究中指出:植硅体碳质量分数与植物吸收利用CO2速率有直接的关系。SONG等[13]在中国不同森林类型植硅体碳封存估测的研究中提出:植硅体碳质量分数与硅质量分数之间存在密切的联系,并且以硅质量分数的3%作为计算植硅体碳的标准。本研究设计硅外源添加以增加毛竹对硅的吸收利用,同时设计氮外源添加提高毛竹光合作用效率及吸收利用CO2的能力,并对不同处理硅、植硅体和植硅体碳质量分数进行分析,发现硅、植硅体和植硅体碳在毛竹不同器官之间的变化规律呈现高度的一致性,并且随着外源氮和硅添加量的变化,毛竹不同器官植硅体与植硅体碳仍然表现出相似的变化规律;除此之外,植硅体与植硅体碳之间及硅与植硅体碳质量分数之间均存在极显著的正相关关系。这一结果与已有竹类植物植硅体碳相关研究结果一致[8, 13, 27],反映了竹林生态系统中硅与植硅体碳之间的内在联系,表明外源硅的添加是毛竹不同器官植硅体碳质量分数增加的主要原因,证明了硅的添加能够促进毛竹植硅体碳汇能力提升。
3.2 毛竹不同器官对外源氮添加的响应差异明显
氮是植物生长最重要的营养元素之一,对于植物光合效率的提高及养分的吸收、利用、积累具有直接的影响[12]。植物对氮的吸收过程复杂且多样,主要包括主动性和被动性吸收2个途径,与光照、温度、pH等环境因素密切相关,与硅的吸收利用相关性较小。本研究中氮-硅交互作用分析结果表明:氮与硅之间均不存在交互作用的显著性,也进一步说明毛竹对氮和硅的吸收是2个相互独立的过程。毛竹叶中碳、氮和植硅体碳质量分数均随着外源氮添加量的增加不断提高,但硅与植硅体质量分数却不断下降 ,主要是由于外源氮的添加极大地促进了叶的生长,导致净生物量在短期内快速积累,而植物对硅的吸收动力主要来源于蒸腾作用[12],在短期内并不会出现大幅变化,因此造成了净生物量积累与植硅体积累不协调的现象,也说明了虽然本研究中硅的添加促进了毛竹对硅的吸收,但氮的添加增加了有机物质的积累,对植硅体形成了稀释效应,因此表现为低氮添加处理植硅体质量分数更高的现象。
随着叶片的老化,大部分氮被转移再利用[28],凋落物氮和碳质量分数均大幅降低,但硅、植硅体和植硅体碳质量分数却并未随之下降,且随着外源氮添加量的增加,凋落物中硅和植硅体碳质量分数有所增加,植硅体质量分数却有所降低,表明尽管外源氮的添加促进了硅的吸收和有机物质的积累,但被吸收的硅并没有形成稳定的植硅体,对植硅体碳的贡献有限,也说明尽管毛竹对氮和硅的吸收利用交互作用不显著,但硅的吸收仍然与氮的添加有关。
进一步对不同处理不同器官及凋落物中植硅体碳占总碳比进行分析,可以更清晰地表明:单纯的氮添加能够促进有机物质的快速积累,但对于提高植硅体碳在总碳中的比例作用有限,而硅的添加对提高植硅体碳在总碳中的比例作用更为明显,这一点也被外源氮添加后碳和植硅体碳呈极显著负相关所证明。
3.3 氮和硅添加对植硅体稳定性的影响
植硅体的稳定性主要决定于其形态、颗粒大小、组分和结构[29−32]。有研究表明:外源硅的添加增加了土壤溶液中单硅酸的浓度,外源氮和硅的添加共同促进了毛竹对硅的吸收,进而增加植硅体在植物体内的积累[33−35],但是这种靠人为因素增加的植硅体已被证明主要是轻组植硅体[31],其稳定性、抗腐蚀能力等均远小于重组植硅体[34, 36],且氮的添加促进了毛竹对氮的吸收利用,改变了植硅体组成成分[31],因此尽管高氮处理促进了毛竹凋落物硅质量分数的增加,但植硅体质量分数仍较低。表明虽然氮的添加对毛竹吸收硅的影响不显著,但对毛竹吸收硅后形成的植硅体的稳定性有显著影响。
4. 结论
毛竹叶中氮质量分数最高,秆中碳质量分数最高,凋落物中硅、植硅体和植硅体碳质量分数均最高。外源氮添加有助于毛竹对硅的吸收和有机物质的积累,外源硅添加有助于毛竹植硅体和植硅体碳质量分数的增加以及植硅体碳占碳比例的提高。
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表 1 2种辣椒素的回归方程、相关系数
Table 1. Regression equation and correlation of two capsaicinoids
组分 回归方程 相关系数 辣椒素 y=8 745.4x+17.858 0.999 8 二氢辣椒素 y=5 795.5x+13.288 0.999 8 说明:y表示峰面积,x表示质量浓度 表 2 2种辣椒素类物质成分加标回收率
Table 2. Recovery of two capsaicinoids
组分 样品质量/mg 加标量/mg 测得量/mg 回收率/% 辣椒素 0.130±0.005 0.150 0.278±0.002 99.186±1.076 二氢辣椒素 0.135±0.003 0.120 0.255±0.002 99.580±1.562 说明:数据为平均值±标准误(n=5) 表 3 4个杭椒品种果实在采收期内的干物质相对含量
Table 3. Content of dry matter in fruits of four Hangzhou pepper cultivars during harvest period
花后时间/d 干物质相对含量/% ‘杭椒12号’ ‘杭椒2号’ ‘杭椒206’ ‘杭椒2731’ 14 7.618±0.392 e 9.015±0.675 d 7.901±0.675 d 8.937±0.420 c 21 7.836±0.189 e 8.391±0.056 d 7.969±0.271 d 8.061±0.149 c 28 8.350±0.217 e 8.352±0.228 d 8.531±0.409 cd 9.052±0.241 c 35 9.365±0.073 d 10.361±0.050 c 9.458±0.302 bc 9.123±0.810 c 42 10.171±0.082 c 12.110±0.309 b 10.095±0.261 b 10.987±0.026 b 49 12.259±0.383 b 14.164±0.070 a 12.023±0.199 a 11.223±0.099 b 56 13.571±0.081 a 14.452±0.070 a 12.553±0.338 a 13.598±0.055 a 说明:数据为平均值±标准误(n=3)。同列不同小写字母表示差异显著(P<0.05) -
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链接本文:
https://zlxb.zafu.edu.cn/article/doi/10.11833/j.issn.2095-0756.20190577