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半蒴苣苔Hemiboea subcapitata是苦苣苔科Gesneriaceae半蒴苣苔属Hemiboea多年生宿根草本[1]，全草入药，味甘，性寒。具有清暑利湿、止咳、生津、解毒的功效，主治咽喉肿痛、外感暑湿、痈肿疮疖、蛇咬伤等症[2]，对烧烫伤有一定的疗效[3]。环境的破坏和对野生药材资源的大量采集，造成了资源的日益匮乏，亟待进行半蒴苣苔的人工栽培以满足市场的需求，但半蒴苣苔人工繁育和栽培的研究尚处于初始阶段，成果不多。在自然状态下，半蒴苣苔通常生长在石灰岩岩缝中，籍匍匐枝行营养繁殖，增殖速度较慢。组织培养技术是苦苣苔科植物引种驯化及繁殖工作中的一种重要手段，以克服植物在迁地保育、繁衍、传播、杂交育种及工厂化生产中的障碍，达到种质资源保护和利用的目的[4]。本研究拟通过组织培养的方法，建立其组培快繁技术体系，为半蒴苣苔种苗规模化繁育提供技术支撑。
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半蒴苣苔植株采自浙江天目山国家级自然保护区，经浙江农林大学李根有教授鉴定为半蒴苣苔。用消过毒的剪刀剪下半蒴苣苔叶片，放入滴有洗洁精的水中浸泡15 min，并用柔软的牙刷轻轻刷去表面污垢，接着用自来水冲洗1 h。而后放置在超净工作台上，用体积分数为75%的乙醇浸泡15 s，用镊子取出叶片后用无菌水冲洗3次，接着放入体积分数为0.1%升汞中消毒6 min，用无菌水冲洗3次，再用无菌滤纸吸干其表面水分。叶片切割成约1 cm × 1 cm，接入Murashige and Skoog（MS）＋1.0 mg·L-16-苄基腺嘌呤（6-BA）＋0.5 mg·L-1萘乙酸（NAA）初代培养基中。培养15 d后叶片切口基部直接分化出芽，待芽长至4～5 cm，具有5～6对叶片时用于后续试验。本研究中，所用的培养基均添加30.0 g·L-1的蔗糖和7.0 g·L-1的琼脂，pH 5.8。培养室光照强度为30～40 μmol·m-2·s-1，光照时间14 h·d-1，温度（25±1） ℃。
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以MS为基本培养基，采用2因素4水平随机实验设计研究植物生长调节物质6-BA和NAA对叶片愈合组织诱导和不定芽分化的影响。6-BA设置4个水平（0.1，0.5，1.0，2.0 mg·L-1），NAA设置4个水平（0.1，0.5，1.0，1.5 mg·L-1），以上培养基均添加活性炭1.5 g·L-1。将半蒴苣苔无菌苗叶片切成约1.0 cm × 1.0 cm大小接入愈伤组织诱导培养基中进行暗培养，接种5瓶·处理-1，接种叶片6片·瓶-1，培养50 d后观测愈合组织诱导和芽分化情况，统计愈合组织诱导率[愈合组织诱导率=（出愈苗数/接种数）×100%]和不定芽分化率[不定芽分化率=（分化苗数/接种数）×100%]，平均每个外植体不定芽分化数（平均每个外植体不定芽分化数=不定芽总数/产生不定芽外植体数），重复3次·处理-1。
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以MS为基本培养基，采用2因素3水平随机实验设计研究植物生长调节物质6-BA和NAA对不定芽增殖的影响。6-BA设置3个水平（0.1，0.5，1.0 mg·L-1），NAA设置3个水平（0，0.5，1.0 mg·L-1）。将生长良好，长1.5～2.0 cm，具有2～3对叶的不定芽接入增殖培养基中进行培养，接种6瓶·处理-1，接种不定芽5个·瓶-1，培养40 d后统计不定芽增殖倍数（增殖倍数=增殖后不定芽数量/增殖前接入不定芽数量），重复3次·处理-1。
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以MS为基本培养基，采用单因素试验设计研究生长素吲哚丁酸IBA对不定芽生根的影响，IBA设置5个水平（0.1，0.5，1.0，1.5，2.0 mg·L-1）。将长约3 cm的不定芽接入生根培养基，接种6瓶·处理-1，接种不定芽5个·瓶-1，培养30 d后统计生根率[生根率=（生根植株/接入植株×）100%]，随机抽取10株测量平均生根数和平均根长，重复3次·处理-1。
取生长健壮、根系良好的组培苗进行开瓶练苗，放到全天自然光照，温度25 ℃的通风条件下练苗7~10 d。练苗结束后，取出组培苗用水清洗干净根部的培养基，移栽于泥炭和蛭石按1∶1均匀混合的栽培基质中，浇透水后在遮光度为70%的大棚中驯化，定期浇水保持苗床湿度，40 d后统计成活率。
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数据采用均值±标准误差表示，采用PASW Statistics 18进行Duncan多重比较，百分率经反正弦平方根转换DEGREES[ASIN（SQRT（NO.））]后进行多重比较和相关分析。
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叶片培养8~10 d开始略微出现卷曲现象，之后均未见明显的愈合组织形成，但在基部切口处可直接分化出白色的芽（图 1-a），在培养约30 d后，芽大量发生。研究发现，半蒴苣苔愈合组织诱导困难，6-BA和NAA不同质量浓度处理均未诱导出愈合组织。在半蒴苣苔叶片基部切口处可以直接分化出不定芽，不定芽分化率随着6-BA和NAA质量浓度上升呈现先升高后下降的现象。同时，在高质量浓度（2.0 mg·L-1）的6-BA处理中，叶片外植体大量褐化。在不同植物生长调节物质组合下不定芽分化率存在显著性差异（P＜0.05），以MS+0.5 mg·L-1 6-BA +1.0 mg·L-1 NAA不定芽分化率最高，达到67.78%，平均每个外植体分化出不定芽3.90个。而MS+0.5 mg·L-1 6-BA +1.0 mg·L-1 NAA不定芽的诱导率虽仅为14.45%，但平均每个外植体分化出不定芽数量最多，达到6.69个（表 1）。
图 1 半蒴苣苔组培再生体系
Figure 1. Regeneraton of Hemiboeα subcαpitαtα
表 1 不同植物生长调节物质配比对半蒴苣苔叶片愈合组织和不定芽分化的影响
Table 1. Effect of plant growth regulators on callus induction and adventitious buds differentiation of Hemiboeα subcαpitαtα
序号 植物生长调节物质/(mg·L-1) 外植体总数/个 愈合诱导率/% 不定芽分化率/% 平均每个外植体不定芽数/个 6-BA NAA 1 0.1 0.1 90 0 10.00±1.93f 3.67 2 0.5 0.1 90 0 13.33±3.85ef 3.50 3 1.0 0.1 90 0 8.89±1.11fg 4.75 4 2.0 0.1 90 0 0.00±0.00h 0.00 5 0.1 0.5 90 0 16.66±3.33def 4.40 6 0.5 0.5 90 0 24.44±2.94c 4.32 7 1.0 0.5 90 0 14.45±2.22ef 6.69 8 2.0 0.5 90 0 2.22±2.22gh 3.50 9 0.1 1.0 90 0 44.44±2.94b 3.63 10 0.5 1.0 90 0 67.78±2.94a 3.90 11 1.0 1.0 90 0 23.33±1.93cd 3.86 12 2.0 1.0 90 0 1.11±1.11h 3.00 13 0.1 1.5 90 0 13.33±1.93ef 5.33 14 0.5 1.5 90 0 20.00±1.92cde 4.22 15 1.0 1.5 90 0 12.22±2.94ef 2.64 16 2.0 1.5 90 0 0.00±0.00h 0.00 -
不定芽接入增殖培养基，10 d左右腋芽开始萌发，15～20 d不定芽大量发生（图 1-b）。不定芽接入增殖培养基培养40 d后，统计不定芽增殖倍数及生长情况（表 2）。研究表明，半蒴苣苔在应试的9个处理中均有较好的增殖率，附加6-BA和NAA的处理平均增殖倍数较高，处理间不定芽增殖倍数存在显著性差异（P＜0.05）。不定芽增殖率随着6-BA和NAA质量浓度上升呈现先升高后下降的现象。不定芽增殖以MS+0.5 mg·L-1 6-BA+0.5 mg·L-1 NAA增殖倍数最高，达到23.43。
表 2 植物生长调节物质配比对半蒴苣苔不定芽增殖的影响
Table 2. Effect of plant growth regulators on adventitious buds proliferation of Hemiboeα subcαpitαtα
序号 植物生长调节物质/(mg·L-1) 接种数/个 增殖倍数 不定芽生长情况 6-BA NAA 1 0.1 0 90 5.63±0.25f 生长速度慢，壮实 2 0.5 0 90 8.90±0.03e 生长速度慢，壮实 3 1.0 0 90 3.07±0.18f 生长速度慢，壮实 4 0.1 0.5 90 19.57±0.93b 生长速度快，瘦弱 5 0.5 0.5 90 23.43±1.41a 生长速度快，瘦弱 6 1.0 0.5 90 21.26±0.81ab 生长速度快，瘦弱 7 0.1 1.0 90 12.21±0.99d 生长速度较快，瘦弱 8 0.5 1.0 90 16.36±1.11c 生长速度较快，瘦弱 9 1.0 1.0 90 11.51±1.22de 生长速度较快，瘦弱 -
不定芽接入生根培养基，5～8 d不定芽基本开始生根，10～15 d不定根大量发生（图 1-d）。培养30 d后统计不定芽生根情况（表 3）。结果表明：半蒴苣苔生根容易，所有处理的生根率均超过90%，其中IBA质量浓度为1.0 mg·L-1和1.5 mg·L-1的培养基中，生根率均达到100%。30 d后观察统计，MS+1.5 mg·L-1 IBA培养基为最适培养基，再生植株平均每株具根9.23条，平均根长2.78 cm（图 1-e）。 生根植株经炼苗后移栽于温室大棚中，以泥炭和蛭石1∶1均匀混合为移栽基质，移栽30 d后，以抽生新芽生长为移栽成活的标准统计成活率，发现移栽成活率达到90%以上（图 1-f）。
表 3 不同质量浓度的IBA对半蒴苣苔生根的影响
Table 3. Effects of different concentration of IBA on rooting of Hemiboeα subcαpitαtα
IBA/(mg.L-1) 接种数/株 生根率/% 每苗平均根数/条 平均根长/cm 生长情况 0.1 100 92.35±5.67a 5.64±0.39c 1.29±0.06c 长势-般，根细短 0.5 100 93.75±6.26a 7.65±0.32b 2.33±0.15b 生长旺盛，根粗长 1.0 100 100.00±0.00a 8.69±0.53a 2.16±0.24b 生长旺盛，根粗长 1.5 100 100.00±0.00a 9.23±0.68a 2.78±0.32a 生长旺盛，根粗长 2.0 100 95.42±5.96a 7.79±0.49b 1.97±0.16b 生长旺盛，根粗短 -
苦苣苔科植物组织培养已有大量的报道[5-10]。汤正辉等[11]以半蒴苣苔叶片为外植体，在诱导芽分化的培养基MS+0.1 mg·L-1 6-BA+0.1 mg·L-1 NAA培养15 d 后，叶片切口处开始肿胀，并出现较为致密的翠绿色愈合组织，约30 d后，部分切口处出现不定芽。本研究以叶片为外植体，均未诱导出愈合组织，且外植体容易褐化，在未褐化叶片切口基部能直接分化出不定芽。较低浓质量度的6-BA（0.5～1.0 mg·L-1）和NAA（0.5～1.0 mg·L-1）对不定芽分化有利，以MS+0.5 mg·L-16-BA+1.0 mg·L-1NAA不定芽分化率最高，达到67.78%，平均每个外植体分化出不定芽3.90个。以半蒴苣苔叶片为外植体进行愈合组织的诱导仍有待进一步研究。
植物组织培养中，一定质量浓度的生长素利于诱导外植体脱分化和促进愈合组织生长，生长素质量浓度过低或过高，均不利于外植体的脱分化和再分化[12]。较低的生长素/细胞分裂素比率有利于不定芽增殖，但过高水平的细胞分裂素促进不定芽的诱导和增殖，往往形成大量细密的无效的不定芽；而较高的生长素/细胞分裂素比率有利于不定芽壮苗和生根[13-14]，细胞分裂素可以促进丛生芽的增殖[15]。半蒴苣苔不定芽增殖过程中单一使用细胞分裂素，不定芽增殖倍数普遍较低，在与低质量浓度的NAA（0.5 mg·L-1）配合使用时，随着6-BA质量浓度的增加，增殖倍数也随之增加，而与较高质量浓度的NAA（1.0 mg·L-1），不定芽增殖倍数随6-BA的质量浓度的升高而降低。因此，在半蒴苣苔不定芽增殖中，6-BA与NAA存在交互作用。
现阶段，半蒴苣苔野生资源日益枯竭，必须依靠人工栽培种植，而人工栽培主要靠异地引种。本研究成功地建立了半蒴苣苔组织培养与植株再生技术体系，为半蒴苣苔种苗生产提供了技术保障，对半蒴苣苔种质资源的保护和离体保存具有重要意义。
Plantlet regeneration of Hemiboea subcapitata with subculturing
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摘要: 为了建立半蒴苣苔Hemiboea subcapitata的组培快繁技术体系,保护和开发利用半蒴苣苔这一民间植物药资源,以MS(Murashige and Skoog)为基本培养基,研究植物生长调节物质6-苄基腺嘌呤(6-BA)和萘乙酸(NAA)组合对叶片愈合组织诱导、不定芽分化,增殖和壮苗生根的影响,筛选出适合半蒴苣苔快繁的最适培养基。结果表明:叶片诱导愈合组织困难,但在叶片基部或切口处可直接诱导分化出不定芽,且随着6-BA 和NAA质量浓度的升高,芽的分化率先上升后降低,以MS+0.5 mg·L-1 6-BA+1.0 mg·L-1 NAA+1.5 g·L-1活性炭(AC)分化率最高,达到67.8%;但平均每外植体诱导芽数以MS+1.0 mg·L-1 6-BA +0.5 mg·L-1 NAA +1.5 g·L-1 AC最多,达到6.69个;不定芽增殖以MS+0.5 mg·L-1 6-BA+0.5 mg·L-1 NAA处理增殖倍数最高,达到23.43;在添加不同质量浓度吲哚丁酸(IBA)的培养基中生根率均超过90%。Abstract: For protection and exploitation of the medicinal plant Hemiboea subcapitata,a rapid propagation system was established through tissue culture for large-scale seedling. Murashige and Skoog (MS) media with different combinations of plant growth regulator[6-benzylaminopurine (6-BA),α-naphthalene acetic acid (NAA) and indole-3-butyric acid (IBA)] ratios was used to optimize the tissue culture of H. subcapitata, including callus induction, shoot proliferation, and rooting. Results showed that callus induction was difficult, but adventitious shoots could be differentiated directly from leaf explants subcultured in different combinations of growth regulators. The best medium for adventitious bud differentiation was MS + 0.5 mg·L-1 6-BA + 1.0 mg·L-1 NAA + 1.5 g·L-1 AC with the bud induction frequency of 67.78%, the average number for each leaf explant was 3.90 buds, and the highest was 6.69 buds. The best medium for subculture proliferation was MS + 0.5 mg·L-1 6-BA + 0.5 mg·L-1 NAA with a proliferation of 23.43 times. For all treatments and with different concentrations of IBA, the rooting ratio was more than 90%. This tissue culture technique and rapid propagation system of H. subcapitata could be used for large-scale seedling propagation in a short time and for technical guidance in large-scale production.
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Key words:
- botany /
- Hemiboea subcapitata /
- leaf explants /
- rapid propagation /
- tissue culture /
- plantlet regeneration
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枇杷黄毛虫Melanographia flexilineata，又名枇杷瘤蛾，属鳞翅目Lepidoptera灯蛾科Arctiidae[1]，是中国南方枇杷Eriobotrya japonica上最主要的害虫。除危害枇杷外，枇杷黄毛虫还危害梨Pyrus spp.，李Prunus spp.，合欢Albizzia julibrissin，紫薇Lagerstroemia india等果树和绿化树。浙江省杭州市余杭区塘栖镇从唐代起就以盛产枇杷而著称于世[2]。近年来，鲜果枇杷价格快速上升，对品质的要求日益提高，枇杷产业迅速发展。枇杷黄毛虫在浙江余抗塘栖1 a发生4代，幼虫危害枇杷嫩芽和嫩叶，发生多时也危害老叶、嫩茎表皮和花果，严重时全树叶片被吃尽，削弱树势[3-4]，影响产量。国内对枇杷黄毛虫的寄主分布、形态、生物学特征等有一定的报道[5-9]，但开展系统监测调查、对其种群动态的研究及应用统计学方法建立预测模型等方面鲜有报道。本研究采用测报灯诱集与田间调查相结合的方法，通过对塘栖枇杷黄毛虫成虫灯下逐日系统监测结合田间定期系统调查，选择不同时期虫口基数、气象资料（气温、相对湿度、降水量）作为预测因子，使用逐步回归法开展其发生期和发生量的预测预报模型研究，对保障枇杷产量和品质，促进枇杷产业发展具有重要意义。
1. 材料和方法
1.1 诱捕设备
自动虫情测报灯由河南省佳多科工贸有限公司生产，灯下接诱导漏斗和接虫袋。
1.2 虫情数据的取得
试验地设在余杭区塘栖枇杷研究所试验基地，枇杷品种为‘红娘子’‘Hongniangzi’和‘白沙’‘Baisha’，试验时期为2008-2013年。枇杷黄毛虫成虫采用频振式测报灯进行逐日诱集，每年开灯时间为4月1日至9月30日，历时约183 d，幼虫隔3 d左右田间调查1次，选取样树5株进行调查，树冠按东南西北划分4个方位，各个方位分上层、中层、下层等3层，将样树划分为12个资源单位，选取新梢枝条1枝·资源单位-1，记载各枝条上的幼虫数量。统计、记录每天诱捕的黄毛虫成虫数量及每周田间查见的黄毛虫幼虫，进行系统监测。
1.3 数据的处理和预报模型的建立
利用2008-2013年枇杷黄毛虫在余杭区塘栖镇监测的系统历史资料，将前5 a的诱虫数据、田间系统调查数据和气象资料用来建模，应用SPSS 17.0软件，采取逐步回归分析方法[10]，建立发生期和发生量的预测预报模型，最后1 a的资料用来检验。原始调查数据不作任何转换，所用气象资料由杭州市气象局提供。
1.4 预测模型的检验
将2014年的实况资料，应用唐启义等[11]提出的病虫测报应验程度判定模式进行验证，从而判断组建模型的可行性。发生期预报应验程度判定模式：
${{T}_{s}}={{100}_{e}}^{\frac{-\pi }{\ln t}{{\left( \frac{{{a}_{1}}-{{a}_{2}}}{\delta } \right)}^{2}}}。$
发生量预报应验程度判定模式：
${{D}_{s}}=100e\frac{-2a\pi }{\left( a+{{a}_{1}} \right)\ln t}\bullet \left( \frac{{{a}_{1}}-{{a}_{2}}}{\delta } \right)。$
其中：Ts和Ds分别为发生期和发生量判定模式的分值，Ts和Ds<40表明预报不准确，40≤Ts和Ds< 60表明预报比较准确，Ts和Ds≥60表明预报准确；a为预报对象常年平均值，a1为实测值，a2为预测值；δ为预报对象常年标准差，t 为自预报发出至实际发生时的期距（d）。
2. 结果与分析
2.1 田间种群数量特征
2.1.1 灯下虫情特征
2008-2013年枇杷黄毛虫灯下成虫诱集量监测结果（图 1）显示：2008年以来，枇杷黄毛虫种群动态特征和数量结构发生了一定的变化：一是越冬代成虫始见期年度间差异较大，其中2008年、2009年和2013年成虫始见期较早，均为4月中旬，以2013年最早（4月14日），2010-2012年相对较迟。二是主害代灯下成虫峰期时间、蛾量年度间有差异，总体均以第3代峰期诱蛾量最高，其次为第2代；峰期持续时间、蛾量受当年气候等条件的影响呈相应的变化，2008年和2009年于7月中旬出现全年诱蛾最高峰，2010-2013年诱蛾最高峰出现在7月下旬；主害期危害程度年度间差异大，2011年7月下旬诱蛾量596头·灯-1·旬-1，与历年同期比第3代成虫峰期蛾量明显偏高，占全年诱集总量的55.18%，2013年7月高峰期蛾量为87头·灯-1·旬-1，明显低于历年同期，分析其原因可能与当年夏季出现罕见高温干旱天气，不利于枇杷黄毛虫生长发育有关。有研究表明：气候较为暖湿的条件下成虫产卵量多、幼虫发生量大[6]，低于20 ℃和高于32 ℃的温度条件下对枇杷黄毛虫世代存活率不利[12]，7月和8月干旱对黄毛虫的发生有抑制作用[6]，也印证了这个可能性；第4代成虫诱集量普遍下降较快，可能与第3代幼虫发生期正值高温天气、成虫在高温下产卵少、卵孵化率下降使幼虫虫量不高有关。
图 1 2008-2013年枇杷黄毛虫灯下成虫种群数量特征Figure 1. Quantitative characteristics of adult Melanographia flexilineata during 2008-20132.1.2 田间幼虫种群动态特点
2008-2013年田间幼虫系统调查（图 2）结果表明：年度间枇杷黄毛虫均以第2代幼虫危害最重，发生期为6月中下旬至7月上旬，高峰期主要出现在6月下旬，少数年份持续至7月上旬危害重，第2代幼虫期正值枇杷成熟阶段，除叶、芽外，果实也受害，对枇杷生产影响最大，2008-2013年高峰期平均虫量140.0~188.9头·株-1·旬-1，占全年总量的32.57%~47.23%。第1代幼虫发生期为5月上旬至6月上旬，高峰期主要出现在5月中旬，少数年份推迟至5月下旬，峰期平均虫量30.6~95.0头·株-1·旬-1，以2008年最高，2013年虫量最低。第3代幼虫发生于7月下旬至8月中旬，此时正值1 a中气温最高、雨水相对较少的季节，特别是2013年为持续高温干旱的年份，成虫产卵少，卵存活率低，发生期总虫量及高峰期虫量均下降，年度间发生量差别较大，2008年高峰期虫量49.0头·株-1·旬-1，高于其他年份，而2013年由于持续高温干旱，虫量明显低于其他年份。第4代幼虫田间查见幼虫较少，与前几代次比虫量下降较快，9月中旬后，幼虫陆续化蛹越冬。
图 2 2008-2013年枇杷黄毛虫幼虫种群数量特征Figure 2. Quantitative characteristics of larvae Melanographia flexilineata during 2008-20132.2 发生期、发生量的预测
2.2.1 发生期、发生量预测模型的建立
枇杷黄毛虫主要以幼虫啃食幼芽、叶片、嫩茎表皮和果实等，对产量和品质影响大。为开展枇杷黄毛虫的适期防治，加强危害风险监测，以第1代至第3代幼虫发生高峰期（y1,y2,y3）和高峰期发生量（y4,y5,y6）为预报对象，初选前期灯下诱蛾量、田间幼虫密度等虫情基数因子及上年12月至当年1月、4月至9月每旬平均气温、平均相对湿度、降水量等相关性较大的气象因子共56个指标作为预报因子，采用逐步回归分析，建立预测预报模型。结果表明：枇杷黄毛虫幼虫发生高峰期、高峰期虫量与前期虫口基数、气象因子密切相关，各有15个因子入选预测模型（表 1和表 2）。发生期预测模型表明：前期田间幼虫虫口密度、降水量对发生高峰期影响最大，各有5个因子入选预测模型，前期灯下诱蛾量、平均相对湿度、气温等也有一定的影响。发生量预测模型表明：枇杷黄毛虫第1代至第3代幼虫旬高峰期虫量与前期田间幼虫密度、灯下诱蛾量呈显著正相关，气象因子中平均相对湿度和降水量分别有5个和4个因子入选预测模型，气温因子中5月下旬、6月上旬、7月上旬平均气温也作为预测因子入选发生量预测模型。
表 1 枇杷黄毛虫发生期预测因子历史数据Table 1. Predictive factors for occurrence period of Melanographia flexilineata年 份 x2 x5 x9 x10 x12 x20 x21 x22 x28 x31 x38 x40 x43 x46 x53 2008 15 77 91.7 15.8 27.5 28 8 3 9.4 66.6 157 22 508 84.7 60.2 2009 20 61.3 36.3 19.2 50.7 9 11 48 31.4 35.8 148 14 380 74.2 0 2010 2 69.5 37.1 12.7 70.6 61 40 9 24.9 24.7 43 15 5 84.2 173.9 2011 5 60.6 68 16.9 16.3 36 25 8 33.8 29.4 165.9 14 289 75 42 2012 19 64.8 148.5 17.8 30.1 25.5 10 9 36 105.3 188.9 9 210 83.3 37.8 2013 3 69.3 23 18.6 12 24.5 8.1 6 53.9 9.9 106.5 5 29 79.7 0 x2，x43分别为4月下旬、7月中旬诱蛾量（头·灯-1·旬-1）；x20，x21，x22，x38，x40分别为5月下旬、6月上旬、6月中旬、6月下旬、7月下旬幼虫量（头·株-1·旬-1）；x5，x46分别为上年12月、当年6月下旬相对湿度（%）；x10为4月中旬气温（℃）；x9，x12，x28，x31，x53分别为1月、4月中旬、5月中旬、5月下旬、7月中旬降水量（mm）。 表 2 枇杷黄毛虫发生量预测因子历史数据Table 2. Predictive factors for occurrence quantity of Melanographia flexilineata年 份 x5 x9 x11 x14 x17 x20 x27 x29 x31 x32 x40 x42 x48 x50 x53 2008 77 91.7 78.7 57.1 64.6 28 54.4 25.3 66.6 24.2 22 0 30.8 26.9 60.2 2009 61.3 36.3 75.8 53.2 49.8 9 60.6 22.6 35.8 24.8 14 328 29.1 58.1 0 2010 69.5 37.1 80.3 60.4 61.3 61 76 22.3 24.7 21.8 15 0 28.9 38.4 173.9 2011 60.6 68 60.1 57.9 63.7 36 52.5 20.8 29.4 24.2 14 0 30.8 2.4 42 2012 64.8 148.5 72.7 66.4 66.3 25.5 70.6 21.1 105.3 24.1 9 0 31.7 15.1 37.8 2013 69.3 23 49 63.7 70.4 24.5 70.1 25.4 9.9 22.9 5 0 31.6 1.5 0 x5，x11，x14，x17，x27分别为上年12月、当年4月中旬、4月下旬、5月上旬、5月中旬相对湿度（%）；x9，x31，x50，x53分别为1月、5月下旬、7月上旬、7月中旬降水量（mm）；x29，x32，x48分别为5月下旬、6月上旬、7月上旬气温（℃）；x20，x40分别为5月下旬、7月下旬幼虫量（头·株-1·旬－1）；x42为7月上旬诱蛾量（头·灯-1·旬－1）。 表 3 枇杷黄毛虫发生期、发生量预测模型Table 3. Forecasting model for occurrence quantity and period of Melanographia flexilineata模型编号 预测模型 R2 1 y1=19.146+0.007x2-0.067 x5 -0.034 x9-0.486 x10+0.028 x12 1.000** 2 y2=-90.562+0.190 x5+0.142 x9+1.119 x11-0.044 x14+0.749 x17 1.000** 3 y3=3.005+0.245 x20+0.005 x21+0.085 x22-0.086 x28+0.010 x31 1.000** 4 y4=389.386+0.238 x20-1.230 x27-7.494 x29 +0.539 x31-0.763 x32 1.000** 5 y5= 34.876-0.139 x38-0.028 x40-0.004 x43-0.048 x46-0.043 x53 1.000** 6 y6=-492.071+2.252 x40+0.010 x42+15.380 x48-0.525 x50+0.061 x53 1.000** y1为第1代幼虫发生高峰期（5月15日为1）；y2为第2代幼虫发生高峰期（6月21日为1）；y3为第3代幼虫发生高峰期（8月1日为1）；y4为第1代幼虫高峰期发生量（头）；y5为第2代幼虫高峰期发生量（头）；y6为第3代幼虫高峰期发生量（头）。 2.2.2 发生期、发生量预测模型的拟合率检验
将2013年的虫情、气象数据，应用1.4节的应验程度判定模式，分别对枇杷黄毛虫第1代至第3代幼虫的发生高峰期、高峰期发生量预测结果进行检验（表 4和表 5）。结果表明：用逐步回归法拟合的枇杷黄毛虫幼虫发生期、发生量模型，评分分值高，均大于99分，在准确的范围内。根据模拟结果，第1代、第2代和第3代枇杷黄毛虫幼虫发生高峰期模型拟合值分别为5月19日、6月25日、8月16日，实际分别为5月19日、6月25日、8月16日；第1代、第2代和第3代幼虫高峰期发生量模型拟合值分别为30.62，106.28和5.83头·株-1·旬-1，实际分别为31，107和6头·株-1·旬-1。模型拟合值接近实测值，拟合结果准确。
表 4 枇杷黄毛虫发生期预测模型验证Table 4. Verification of forecastin model for occurrence period of Melanographia flexilineata预测对象 a1 a2 t δ Ts 结论 第1代幼虫 5 5.04 10 2.11 99.95 准确 第2代幼虫 5 5.02 5 3.77 99.99 准确 第3代幼虫 16 15.99 15 5.81 100 准确 表 5 枇杷黄毛虫发生量预测模型验证Table 5. Verification of forecastin model for occurrence quantity of Melanographia flexilineata预测对象 a a1 a2 t δ Ts 结论 第1代幼虫 53.75 31 30.62 10 15.03 100 准确 第2代幼虫 152.55 107 106.28 5 26.27 99.98 准确 第3代幼虫 22.67 6 5.83 15 13.22 99.97 准确 3. 小结与讨论
3.1 枇杷黄毛虫种群特征及发生规律
本研究对枇杷黄毛虫进行了灯下诱蛾及田间幼虫系统调查。结果表明：枇杷黄毛虫在浙江余杭塘栖田间虫量与越冬期温湿度条件、主害代前期虫口基数及气候条件等密切相关，灯下诱蛾年度间总虫量2008年和2011年最高，2013年明显低于历年同期，与当年夏季持续高温干旱、不利于枇杷黄毛虫生长发育有关。田间幼虫量也呈现出相似的趋性，以2011年最高，2013年最低。关于枇杷黄毛虫在中国南方枇杷产区的每年发生代数、种群动态等，国内相关文献主要为福建[3, 5]、浙江[6-7, 12]等地的调查研究，在福建福州1 a发生5代[5]，上海地区1 a发生3代[13]。本研究表明枇杷黄毛虫在余杭塘栖1 a发生4代，与前人报道一致[6-7]，越冬代成虫始见期2008-2013年在4月中旬至下旬（4月14日至4月29日），2008年、2009年、2013年较早，2010-2012年相对较迟，与王恩等[6]的研究结果较一致（4月20日），比何富泉等[7]报道的（5月上旬）约早15~20 d。塘栖枇杷黄毛虫田间幼虫量年度间均以第2代危害最重，发生高峰期主要出现在6月下旬，少数年份推迟至7月上旬，主害代灯下成虫峰期时间、蛾量年度间有差异，总体均以第3代峰期诱蛾量最高，其次为第2代，第4代灯下成虫与田间幼虫量均下降较快，9月中旬后，幼虫陆续在树皮裂缝中、分枝处或树干基部和附近灌木上吐丝、结茧、化蛹越冬。
3.2 种群动态预测模型的影响因素
本研究对枇杷黄毛虫发生的相关因素进行了调查和统计分析，筛选出发生期和发生量各15个因子，建立了种群动态预测模型，为预测各代次枇杷黄毛虫的发生高峰、开展适期防治提供了依据。枇杷黄毛虫发生高峰期受前期田间幼虫虫口密度、降水量影响最大；田间幼虫高峰期发生量与前期虫口基数呈极显著正相关，是枇杷黄毛虫发生的最重要因素，平均相对湿度、降水量、气温等气象因子也有一定的相关性，春夏气候较为暖湿的年份，成虫产卵量多，第1代和第2代幼虫田间发生量大，气温过高则卵孵化率、幼虫存活率下降[12]，特别是2013年夏季高温干旱对黄毛虫的发生有抑制作用，而比较暖湿的季节有利于黄毛虫发生。本研究引入了多年来枇杷黄毛虫发生期每旬平均气温、相对湿度、降水量等气象因子及前期虫口基数进行建模，应用唐启义等[11]提出的应验程度判定模式进行拟合率检验，评分分值均在90以上，模型拟合值与实测值接近，拟合结果准确，对今后枇杷黄毛虫的适时、准确预报具有一定的实用价值，可供杭州地区及气象等环境条件总体较为相似的地区应用。
3.3 预测预报技术的完善与发展
建立枇杷黄毛虫种群动态模型的目的是为了预测预报更为适时准确、更有效地为生产服务，以减少因该虫危害造成的损失。枇杷黄毛虫年度间发生期和发生量受当年气候条件等因素影响，在每年发生盛期内又呈季节性消长，采用多年数据建立种群动态模型可实行较准确的预测。本模型主要依据2008年以来的数据资料，为更充分地显现其年度间的周期性规律，增强预报结果的准确性，笔者将逐年追加监测资料，使样本总数增多，校正模型，使预测精度不断提高，更好地服务于生产实际。
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表 1 不同植物生长调节物质配比对半蒴苣苔叶片愈合组织和不定芽分化的影响
Table 1. Effect of plant growth regulators on callus induction and adventitious buds differentiation of Hemiboeα subcαpitαtα
序号 植物生长调节物质/(mg·L-1) 外植体总数/个 愈合诱导率/% 不定芽分化率/% 平均每个外植体不定芽数/个 6-BA NAA 1 0.1 0.1 90 0 10.00±1.93f 3.67 2 0.5 0.1 90 0 13.33±3.85ef 3.50 3 1.0 0.1 90 0 8.89±1.11fg 4.75 4 2.0 0.1 90 0 0.00±0.00h 0.00 5 0.1 0.5 90 0 16.66±3.33def 4.40 6 0.5 0.5 90 0 24.44±2.94c 4.32 7 1.0 0.5 90 0 14.45±2.22ef 6.69 8 2.0 0.5 90 0 2.22±2.22gh 3.50 9 0.1 1.0 90 0 44.44±2.94b 3.63 10 0.5 1.0 90 0 67.78±2.94a 3.90 11 1.0 1.0 90 0 23.33±1.93cd 3.86 12 2.0 1.0 90 0 1.11±1.11h 3.00 13 0.1 1.5 90 0 13.33±1.93ef 5.33 14 0.5 1.5 90 0 20.00±1.92cde 4.22 15 1.0 1.5 90 0 12.22±2.94ef 2.64 16 2.0 1.5 90 0 0.00±0.00h 0.00 
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表 2 植物生长调节物质配比对半蒴苣苔不定芽增殖的影响
Table 2. Effect of plant growth regulators on adventitious buds proliferation of Hemiboeα subcαpitαtα
序号 植物生长调节物质/(mg·L-1) 接种数/个 增殖倍数 不定芽生长情况 6-BA NAA 1 0.1 0 90 5.63±0.25f 生长速度慢，壮实 2 0.5 0 90 8.90±0.03e 生长速度慢，壮实 3 1.0 0 90 3.07±0.18f 生长速度慢，壮实 4 0.1 0.5 90 19.57±0.93b 生长速度快，瘦弱 5 0.5 0.5 90 23.43±1.41a 生长速度快，瘦弱 6 1.0 0.5 90 21.26±0.81ab 生长速度快，瘦弱 7 0.1 1.0 90 12.21±0.99d 生长速度较快，瘦弱 8 0.5 1.0 90 16.36±1.11c 生长速度较快，瘦弱 9 1.0 1.0 90 11.51±1.22de 生长速度较快，瘦弱
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表 3 不同质量浓度的IBA对半蒴苣苔生根的影响
Table 3. Effects of different concentration of IBA on rooting of Hemiboeα subcαpitαtα
IBA/(mg.L-1) 接种数/株 生根率/% 每苗平均根数/条 平均根长/cm 生长情况 0.1 100 92.35±5.67a 5.64±0.39c 1.29±0.06c 长势-般，根细短 0.5 100 93.75±6.26a 7.65±0.32b 2.33±0.15b 生长旺盛，根粗长 1.0 100 100.00±0.00a 8.69±0.53a 2.16±0.24b 生长旺盛，根粗长 1.5 100 100.00±0.00a 9.23±0.68a 2.78±0.32a 生长旺盛，根粗长 2.0 100 95.42±5.96a 7.79±0.49b 1.97±0.16b 生长旺盛，根粗短
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链接本文:
https://zlxb.zafu.edu.cn/article/doi/10.11833/j.issn.2095-0756.2014.01.025
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