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松材线虫脂滴4种染色方法的比较

黄林玲 周湘 胡加付 林海萍 郭恺

黄林玲, 周湘, 胡加付, 林海萍, 郭恺. 松材线虫脂滴4种染色方法的比较[J]. 浙江农林大学学报. doi: 10.11833/j.issn.2095-0756.20200674
引用本文: 黄林玲, 周湘, 胡加付, 林海萍, 郭恺. 松材线虫脂滴4种染色方法的比较[J]. 浙江农林大学学报. doi: 10.11833/j.issn.2095-0756.20200674
HUANG Linling, ZHOU Xiang, HU Jiafu, LIN Haiping, GUO Kai. Comparison of four lipid droplets staining methods in Bursaphelenchus xylophilus[J]. Journal of Zhejiang A&F University. doi: 10.11833/j.issn.2095-0756.20200674
Citation: HUANG Linling, ZHOU Xiang, HU Jiafu, LIN Haiping, GUO Kai. Comparison of four lipid droplets staining methods in Bursaphelenchus xylophilus[J]. Journal of Zhejiang A&F University. doi: 10.11833/j.issn.2095-0756.20200674

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松材线虫脂滴4种染色方法的比较

doi: 10.11833/j.issn.2095-0756.20200674
基金项目: 国家自然科学基金资助项目(31870633、31670652、31200487);浙江省重点研发计划资助项目(2019C02024)
详细信息
    作者简介: 黄林玲(ORCID: 0000-0001-8150-5876),从事林木病理学研究。E-mail: 2440613499@qq.com
    通信作者: 郭恺(ORCID: 0000-0001-9821-6288),副教授,博士,从事植物病原线虫学研究。E-mail: kaiguo@zafu.edu.cn
  • 中图分类号: S763.3

Comparison of four lipid droplets staining methods in Bursaphelenchus xylophilus

  • 摘要:   目的  从4种脂滴染色方法中筛选最适合松材线虫Bursaphelenchus xylophilus的脂滴染色方法。  方法  采用苏丹黑B染色、尼罗红染色、油红O染色和后置油红O染色等4种染色方法来固定和表征松材线虫体内脂滴的分布,对染色后的线虫进行显微观察和拍摄,并用ImageJ软件对皮下和肠道内染色的脂滴像素进行统计。  结果  4种脂滴染色方法对松材线虫的脂滴都有一定的染色效果。显微拍照后观察脂滴与ImageJ软件图像处理后像素强度比较结果显示:苏丹黑B染色脂滴像素为200.00×1017 m2,尼罗红染色脂滴像素41.64×1012 m2,油红O染色脂滴像素52.12×1017 m2,后置油红O染色脂滴像素83.85×1017 m2。苏丹黑B染色脂滴平均像素强度最高,尼罗红染色脂滴平均像素强度最低,而后置油红O法染色脂滴经计算转换产生了与原始图像一致的表征,实现单个脂滴的良好分离。  结论  综合染色方法的简易、染色时间的长短和染色后的效果,改良后的后置油红O法是最佳的松材线虫脂滴染色方法,能清晰显示脂滴大小及分布。图4表1参17
  • 图  1  苏丹黑B、尼罗河红染色线虫中相同脂滴

    Figure  1  Sudan black B, fixed Nile red stained nematode in same lipid droplets

    图  2  油红O、后置油红O染色线虫中相同脂滴

    Figure  2  Oil red O,post-fix oil red O stained the same lipid droplets in B. xylophilus

    图  3  使用苏丹黑B,尼罗红,油红O和后置油红O染色的松材线虫脂滴平均像素的ImageJ图像分析结果

    Figure  3  ImageJ image analysis results of average pixels of B. xylophilus lipid droplets stained with Sudan black B, Nile red, oil red O, and post-fix oil red

    图  4  油红O染色的松材线虫脂滴的图像处理

    Figure  4  Image processing of oil red O stained adipocytes in B. xylophilus

    表  1  不同染料标记和方法的比较

    Table  1.   Comparison of different dyestuff markers and methods

    染料储备溶液脱水步骤染色时间/min输出颜色实现单个脂滴分离
    油红O5 g·L−1异丙醇 30红色 
    苏丹黑B体积分数为70%乙醇乙醇系列360深蓝色
    尼罗红丙酮乙醇系列 30浅红色
    后置油红O5 g·L−1异丙醇体积分数为60%异丙醇 60红色 
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出版历程
  • 收稿日期:  2020-10-25
  • 修回日期:  2021-04-01

松材线虫脂滴4种染色方法的比较

doi: 10.11833/j.issn.2095-0756.20200674
    基金项目:  国家自然科学基金资助项目(31870633、31670652、31200487);浙江省重点研发计划资助项目(2019C02024)
    作者简介:

    黄林玲(ORCID: 0000-0001-8150-5876),从事林木病理学研究。E-mail: 2440613499@qq.com

    通信作者: 郭恺(ORCID: 0000-0001-9821-6288),副教授,博士,从事植物病原线虫学研究。E-mail: kaiguo@zafu.edu.cn
  • 中图分类号: S763.3

摘要:   目的  从4种脂滴染色方法中筛选最适合松材线虫Bursaphelenchus xylophilus的脂滴染色方法。  方法  采用苏丹黑B染色、尼罗红染色、油红O染色和后置油红O染色等4种染色方法来固定和表征松材线虫体内脂滴的分布,对染色后的线虫进行显微观察和拍摄,并用ImageJ软件对皮下和肠道内染色的脂滴像素进行统计。  结果  4种脂滴染色方法对松材线虫的脂滴都有一定的染色效果。显微拍照后观察脂滴与ImageJ软件图像处理后像素强度比较结果显示:苏丹黑B染色脂滴像素为200.00×1017 m2,尼罗红染色脂滴像素41.64×1012 m2,油红O染色脂滴像素52.12×1017 m2,后置油红O染色脂滴像素83.85×1017 m2。苏丹黑B染色脂滴平均像素强度最高,尼罗红染色脂滴平均像素强度最低,而后置油红O法染色脂滴经计算转换产生了与原始图像一致的表征,实现单个脂滴的良好分离。  结论  综合染色方法的简易、染色时间的长短和染色后的效果,改良后的后置油红O法是最佳的松材线虫脂滴染色方法,能清晰显示脂滴大小及分布。图4表1参17

English Abstract

黄林玲, 周湘, 胡加付, 林海萍, 郭恺. 松材线虫脂滴4种染色方法的比较[J]. 浙江农林大学学报. doi: 10.11833/j.issn.2095-0756.20200674
引用本文: 黄林玲, 周湘, 胡加付, 林海萍, 郭恺. 松材线虫脂滴4种染色方法的比较[J]. 浙江农林大学学报. doi: 10.11833/j.issn.2095-0756.20200674
HUANG Linling, ZHOU Xiang, HU Jiafu, LIN Haiping, GUO Kai. Comparison of four lipid droplets staining methods in Bursaphelenchus xylophilus[J]. Journal of Zhejiang A&F University. doi: 10.11833/j.issn.2095-0756.20200674
Citation: HUANG Linling, ZHOU Xiang, HU Jiafu, LIN Haiping, GUO Kai. Comparison of four lipid droplets staining methods in Bursaphelenchus xylophilus[J]. Journal of Zhejiang A&F University. doi: 10.11833/j.issn.2095-0756.20200674

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