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香榧ISSR-PCR扩增条件的优化和引物筛选

叶生月 陈钢 张慧 刘建杰 曾燕如 吴慧敏

叶生月, 陈钢, 张慧, 刘建杰, 曾燕如, 吴慧敏. 香榧ISSR-PCR扩增条件的优化和引物筛选[J]. 浙江农林大学学报, 2010, 27(1): 87-92. doi: 10.11833/j.issn.2095-0756.2010.01.014
引用本文: 叶生月, 陈钢, 张慧, 刘建杰, 曾燕如, 吴慧敏. 香榧ISSR-PCR扩增条件的优化和引物筛选[J]. 浙江农林大学学报, 2010, 27(1): 87-92. doi: 10.11833/j.issn.2095-0756.2010.01.014
YE Sheng-yue, CHEN Gang, ZHANG Hui, LIU Jian-jie, ZENG Yan-ru, WU Hui-min. Optimization of an ISSR-PCR system and primer screening for Torreya grandis ‘Merrillii’[J]. Journal of Zhejiang A&F University, 2010, 27(1): 87-92. doi: 10.11833/j.issn.2095-0756.2010.01.014
Citation: YE Sheng-yue, CHEN Gang, ZHANG Hui, LIU Jian-jie, ZENG Yan-ru, WU Hui-min. Optimization of an ISSR-PCR system and primer screening for Torreya grandis ‘Merrillii’[J]. Journal of Zhejiang A&F University, 2010, 27(1): 87-92. doi: 10.11833/j.issn.2095-0756.2010.01.014

香榧ISSR-PCR扩增条件的优化和引物筛选

doi: 10.11833/j.issn.2095-0756.2010.01.014
详细信息
    通信作者: 曾燕如

Optimization of an ISSR-PCR system and primer screening for Torreya grandis ‘Merrillii’

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    Corresponding author: ZENG Yan-ru
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出版历程
  • 刊出日期:  2010-02-20

香榧ISSR-PCR扩增条件的优化和引物筛选

doi: 10.11833/j.issn.2095-0756.2010.01.014
    通信作者: 曾燕如

摘要: 以香榧Torreya grandis Merrillii基因组DNA为材料,对影响简单序列重复区间扩增?鄄聚合酶链式反应(ISSR-PCR)的Taq酶用量、Mg2+浓度、模板DNA用量、磷酸碱基脱氧核苷酸(dNTPs)浓度和引物浓度等进行了优化试验。优化后的香榧ISSR-PCR扩增体系为:总容积20 L,包括30 ng模板DNA,16.67 nkat Taq酶,0.350 molL -1引物,1.625 mmolL-1 Mg2+,0.250 mmolL-1 dNTPs,10 PCR buffer 2 L。PCR扩增程序:94 ℃变性5.0 min;35个循环:94 ℃变性30 s,退火45 s,退火温度视引物而定,72 ℃延伸1.5 min;最后72 ℃延伸7.0 min,4 ℃保温。在此基础上,从77个ISSR引物中筛选出34个适合香榧ISSR分析的引物,且通过梯度PCR确定了各自最适的退火温度。研究结果为香榧遗传图谱构建打下了基础。图4表1参12

English Abstract

叶生月, 陈钢, 张慧, 刘建杰, 曾燕如, 吴慧敏. 香榧ISSR-PCR扩增条件的优化和引物筛选[J]. 浙江农林大学学报, 2010, 27(1): 87-92. doi: 10.11833/j.issn.2095-0756.2010.01.014
引用本文: 叶生月, 陈钢, 张慧, 刘建杰, 曾燕如, 吴慧敏. 香榧ISSR-PCR扩增条件的优化和引物筛选[J]. 浙江农林大学学报, 2010, 27(1): 87-92. doi: 10.11833/j.issn.2095-0756.2010.01.014
YE Sheng-yue, CHEN Gang, ZHANG Hui, LIU Jian-jie, ZENG Yan-ru, WU Hui-min. Optimization of an ISSR-PCR system and primer screening for Torreya grandis ‘Merrillii’[J]. Journal of Zhejiang A&F University, 2010, 27(1): 87-92. doi: 10.11833/j.issn.2095-0756.2010.01.014
Citation: YE Sheng-yue, CHEN Gang, ZHANG Hui, LIU Jian-jie, ZENG Yan-ru, WU Hui-min. Optimization of an ISSR-PCR system and primer screening for Torreya grandis ‘Merrillii’[J]. Journal of Zhejiang A&F University, 2010, 27(1): 87-92. doi: 10.11833/j.issn.2095-0756.2010.01.014

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