甜槠ISSR-PCR 反应体系的正交优化

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甜槠ISSR-PCR 反应体系的正交优化

张文标 , 金则新 , 李钧敏 , 潘冠琼

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张文标, 金则新, 李钧敏, 潘冠琼. 甜槠ISSR-PCR 反应体系的正交优化[J]. 浙江农林大学学报, 2006, 23(5): 516-520.

引用本文:

张文标, 金则新, 李钧敏, 潘冠琼. 甜槠ISSR-PCR 反应体系的正交优化[J]. 浙江农林大学学报, 2006, 23(5): 516-520.

ZHANG Wen-biao, JIN Ze-xin, LI Jun-min, PAN Guan-qiong. Optimization of ISSR-PCR reaction system of Castanopsis eyrei by orthogonal design[J]. Journal of Zhejiang A&F University, 2006, 23(5): 516-520.

Citation:

ZHANG Wen-biao, JIN Ze-xin, LI Jun-min, PAN Guan-qiong. Optimization of ISSR-PCR reaction system of Castanopsis eyrei by orthogonal design[J]. Journal of Zhejiang A&F University, 2006, 23(5): 516-520.

甜槠ISSR-PCR 反应体系的正交优化

张文标^1,2, ,,
金则新^2, ,,
李钧敏²,
潘冠琼²

1.
西南师范大学三峡库区生态环境教育部重点实验室, 重庆400715;
2.
台州学院生态研究所, 浙江临海317000

基金项目:

浙江省自然科学基金资助项目(Y504220)

作者简介: 张文标, 硕士研究生, 从事植物生态学研究。E-mail :zhangwb0918@hotmail.com 。通讯作者:金则新, 教授, 硕士, 从事植物生态学研究。E-mail:jzx @tzc.edu.cn ;张文标, 硕士研究生, 从事植物生态学研究。E-mail :zhangwb0918@hotmail.com 。通讯作者:金则新, 教授, 硕士, 从事植物生态学研究。E-mail:jzx @tzc.edu.cn

通信作者: 张文标, 硕士研究生, 从事植物生态学研究。通讯作者:金则新,教授, 硕士, 从事植物生态学研究。; 张文标, 硕士研究生, 从事植物生态学研究。通讯作者:金则新,教授, 硕士, 从事植物生态学研究。

中图分类号: Q946 ;S792.17

Optimization of ISSR-PCR reaction system of Castanopsis eyrei by orthogonal design

1.
Key Laboratory of the Three Gorge Reservoir Regions Eco-Environment of Ministry of Education, Southwest China Normal University , Chongqing 400715 , China;
2.
Institute of Ecology , Taizhou University , Linhai 317000 , Zhejiang , China

Funds:

浙江省自然科学基金资助项目(Y504220)

摘要: 对甜槠Castanopsis eyrei 进行遗传多样性研究的过程中, 为了获得清晰可靠、重复性强的ISSR 扩增结果, 利用正交设计对Mg 2+ , dNTP , 引物, Taq 酶, 牛血清蛋白(BSA )和模板DNA 等6 种因素5 个水平进行筛选和优化。确定甜槠ISSR-PCR 最适宜反应体系为:10 L 反应体中, 1 Taq 酶配套缓冲液(10 mmolL-1 Tris-HCl , pH 9.0 , 50 mmolL-1 KCl , 10 gL-1 TritonX-100), 1.7 mmolL-1 Mg 2+ , 0.25 mmolL-1 dNTP , 8.34 nkat Taq DNA 聚合酶, 1.5 gL-1牛血清白蛋白, 6 pmol 引物, 12 ng 模板DNA 。甜槠扩增时引物UBC846 的最适退火温度为56.3 ℃。图2 表1 参23
- 植物学 /
- ISSR-PCR /
- 正交设计 /
- 0优化 /
- 甜槠
Abstract: Obtaining the stable and repeatable ISSR-PCR amplification result is the basic work to study genetic diversity of Castanopsis eyrei .The ISSR-PCR amplification system was optimized by using orthogonal design in six factors and five levels (Mg2 + , dNTP , primer , Taq DNA polymerase , bovine serum albumin and template DNA).The suitable reaction conditions of ISSR-PCR were shown as follows :1 Taq buffer (10 mmolL-1 Tris-HCl , pH 9.0 , 50 mmolL-1 KCl , 10 gL-1 TritonX-100), 1.7 mmolL-1 Mg 2+ , 0.25 mmolL-1 dNTP , 8.34 nkat Taq DNA polymerase , 1.5 gL-1 bovine serum albumin , 6 pmol primer , 12 ng template DNA in 10 L reaction volume .The optimal annealing temperature for primer UBC 846 was 56.3 ℃.[ Ch , 2 fig .1 tab .23 ref .]
- botany /
- ISSR-PCR /
- orthogonal design /
- optimization /
- Castanopsis eyrei

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[2]	张洁, 尹德洁, 关海燕, 屈琦琦, 董丽. 景天属植物研究综述 . 浙江农林大学学报, 2018, 35(6): 1166-1176. doi: 10.11833/j.issn.2095-0756.2018.06.022
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链接本文:
https://zlxb.zafu.edu.cn/article/id/1476

https://zlxb.zafu.edu.cn/article/zjnldxxb/2006/5/516

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甜槠ISSR-PCR 反应体系的正交优化

1. 西南师范大学三峡库区生态环境教育部重点实验室, 重庆400715;

2. 台州学院生态研究所, 浙江临海317000

基金项目:

浙江省自然科学基金资助项目(Y504220)

作者简介:
张文标, 硕士研究生, 从事植物生态学研究。E-mail :zhangwb0918@hotmail.com 。通讯作者:金则新, 教授, 硕士, 从事植物生态学研究。E-mail:jzx @tzc.edu.cn

张文标, 硕士研究生, 从事植物生态学研究。E-mail :zhangwb0918@hotmail.com 。通讯作者:金则新, 教授, 硕士, 从事植物生态学研究。E-mail:jzx @tzc.edu.cn

通信作者: 张文标, 硕士研究生, 从事植物生态学研究。通讯作者:金则新,教授, 硕士, 从事植物生态学研究。; 张文标, 硕士研究生, 从事植物生态学研究。通讯作者:金则新,教授, 硕士, 从事植物生态学研究。

收稿日期: 2005-10-31
修回日期: 2006-05-15
刊出日期: 2006-10-20

中图分类号: Q946 ;S792.17

关键词:

摘要: 对甜槠Castanopsis eyrei 进行遗传多样性研究的过程中, 为了获得清晰可靠、重复性强的ISSR 扩增结果, 利用正交设计对Mg 2+ , dNTP , 引物, Taq 酶, 牛血清蛋白(BSA )和模板DNA 等6 种因素5 个水平进行筛选和优化。确定甜槠ISSR-PCR 最适宜反应体系为:10 L 反应体中, 1 Taq 酶配套缓冲液(10 mmolL-1 Tris-HCl , pH 9.0 , 50 mmolL-1 KCl , 10 gL-1 TritonX-100), 1.7 mmolL-1 Mg 2+ , 0.25 mmolL-1 dNTP , 8.34 nkat Taq DNA 聚合酶, 1.5 gL-1牛血清白蛋白, 6 pmol 引物, 12 ng 模板DNA 。甜槠扩增时引物UBC846 的最适退火温度为56.3 ℃。图2 表1 参23

English Abstract

张文标, 金则新, 李钧敏, 潘冠琼. 甜槠ISSR-PCR 反应体系的正交优化[J]. 浙江农林大学学报, 2006, 23(5): 516-520.

引用本文:

张文标, 金则新, 李钧敏, 潘冠琼. 甜槠ISSR-PCR 反应体系的正交优化[J]. 浙江农林大学学报, 2006, 23(5): 516-520.

ZHANG Wen-biao, JIN Ze-xin, LI Jun-min, PAN Guan-qiong. Optimization of ISSR-PCR reaction system of Castanopsis eyrei by orthogonal design[J]. Journal of Zhejiang A&F University, 2006, 23(5): 516-520.

Citation:

ZHANG Wen-biao, JIN Ze-xin, LI Jun-min, PAN Guan-qiong. Optimization of ISSR-PCR reaction system of Castanopsis eyrei by orthogonal design[J]. Journal of Zhejiang A&F University, 2006, 23(5): 516-520.

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