留言板

尊敬的读者、作者、审稿人, 关于本刊的投稿、审稿、编辑和出版的任何问题, 您可以本页添加留言。我们将尽快给您答复。谢谢您的支持!

姓名
邮箱
手机号码
标题
留言内容
验证码

4种楠木AFLP反应体系优化建立

周生财 黄华宏 童再康 吴小林

周生财, 黄华宏, 童再康, 吴小林. 4种楠木AFLP反应体系优化建立[J]. 浙江农林大学学报, 2013, 30(5): 789-796. doi: 10.11833/j.issn.2095-0756.2013.05.024
引用本文: 周生财, 黄华宏, 童再康, 吴小林. 4种楠木AFLP反应体系优化建立[J]. 浙江农林大学学报, 2013, 30(5): 789-796. doi: 10.11833/j.issn.2095-0756.2013.05.024
ZHOU Shengcai, HUANG Huahong, TONG Zaikang, WU Xiaolin. Optimization of an AFLP protocol with four Phoebe species[J]. Journal of Zhejiang A&F University, 2013, 30(5): 789-796. doi: 10.11833/j.issn.2095-0756.2013.05.024
Citation: ZHOU Shengcai, HUANG Huahong, TONG Zaikang, WU Xiaolin. Optimization of an AFLP protocol with four Phoebe species[J]. Journal of Zhejiang A&F University, 2013, 30(5): 789-796. doi: 10.11833/j.issn.2095-0756.2013.05.024

4种楠木AFLP反应体系优化建立

doi: 10.11833/j.issn.2095-0756.2013.05.024
基金项目: 

浙江省重大科技攻关项目(2012C12908-4)

详细信息
    通信作者: 童再康

Optimization of an AFLP protocol with four Phoebe species

More Information
    Corresponding author: TONG Zaikang
计量
  • 文章访问数:  7856
  • HTML全文浏览量:  72
  • PDF下载量:  643
  • 被引次数: 0
出版历程
  • 收稿日期:  2012-10-08
  • 修回日期:  2013-03-12
  • 刊出日期:  2013-10-20

4种楠木AFLP反应体系优化建立

doi: 10.11833/j.issn.2095-0756.2013.05.024
    基金项目:

    浙江省重大科技攻关项目(2012C12908-4)

    通信作者: 童再康

摘要: 采用核酸电泳缓冲液(TNE)结合十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)提取的高质量楠木Phoebe基因组脱氧核糖核苷酸(DNA)可满足扩增片段长度多态性(AFLP)分析的要求。利用浙江楠Phoebe chekiangensis基因组DNA优化建立楠木AFLP反应体系如下:酶切反应300 ng基因组DNA,0.3 L缓冲液4,0.3 L牛血清白蛋白(100 BSA),50 nkat EcoR,25 nkat Mse,双蒸水加至30.0 L放置37 ℃恒温箱酶切4 h,聚合酶链式反应(PCR)仪上65 ℃15 min;连接反应20.0 L酶切产物,2.5 L T4缓冲液,666.8 nkat T4 连接酶,5 pmol EcoR接头,10 pmol Mse接头,双蒸水加至25.0 L,16 ℃连接过夜(10 ~14 h);预扩增反应2.0 L连接产物,2.0 L 10 缓冲液,31.25 nmol镁离子,16.67 nkat TaqDNA聚合酶,4 pmol脱氧核糖核苷三磷酸(dNTP),预扩增引物(E+A,M+C)各6 pmol,双蒸水加至20.0 L;选扩增反应稀释40倍的预扩产物2.0 L,2.0 L 10缓冲液,31.25 nmol镁离子,4 pmol dNTP,16.67 nkat TaqDNA聚合酶,选扩增引物(M+CNN)15 pmol,选扩增引物(E+ANN)12 pmol,双蒸水加至20.0 L。利用上面体系在64对选扩引物中筛出13对适于浙江楠AFLP分析的最佳引物组合。图5表3参24

English Abstract

周生财, 黄华宏, 童再康, 吴小林. 4种楠木AFLP反应体系优化建立[J]. 浙江农林大学学报, 2013, 30(5): 789-796. doi: 10.11833/j.issn.2095-0756.2013.05.024
引用本文: 周生财, 黄华宏, 童再康, 吴小林. 4种楠木AFLP反应体系优化建立[J]. 浙江农林大学学报, 2013, 30(5): 789-796. doi: 10.11833/j.issn.2095-0756.2013.05.024
ZHOU Shengcai, HUANG Huahong, TONG Zaikang, WU Xiaolin. Optimization of an AFLP protocol with four Phoebe species[J]. Journal of Zhejiang A&F University, 2013, 30(5): 789-796. doi: 10.11833/j.issn.2095-0756.2013.05.024
Citation: ZHOU Shengcai, HUANG Huahong, TONG Zaikang, WU Xiaolin. Optimization of an AFLP protocol with four Phoebe species[J]. Journal of Zhejiang A&F University, 2013, 30(5): 789-796. doi: 10.11833/j.issn.2095-0756.2013.05.024

目录

    /

    返回文章
    返回