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农杆菌介导遗传转化获得转CP4基因籼稻的研究

胡欢 李媛 丁筠 曹含章 吕尊富 李飞飞

胡欢, 李媛, 丁筠, 曹含章, 吕尊富, 李飞飞. 农杆菌介导遗传转化获得转CP4基因籼稻的研究[J]. 浙江农林大学学报. doi: 10.11833/j.issn.2095-0756.20200436
引用本文: 胡欢, 李媛, 丁筠, 曹含章, 吕尊富, 李飞飞. 农杆菌介导遗传转化获得转CP4基因籼稻的研究[J]. 浙江农林大学学报. doi: 10.11833/j.issn.2095-0756.20200436
HU Huan, LI Yuan, DING Yun, CAO Hanzhang, LÜ Zunfu, LI Feifei. Agrobacterium-mediated transformation of CP4 gene into indica rice[J]. Journal of Zhejiang A&F University. doi: 10.11833/j.issn.2095-0756.20200436
Citation: HU Huan, LI Yuan, DING Yun, CAO Hanzhang, LÜ Zunfu, LI Feifei. Agrobacterium-mediated transformation of CP4 gene into indica rice[J]. Journal of Zhejiang A&F University. doi: 10.11833/j.issn.2095-0756.20200436

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农杆菌介导遗传转化获得转CP4基因籼稻的研究

doi: 10.11833/j.issn.2095-0756.20200436
基金项目: 国家自然科学基金青年基金资助项目(31401461);浙江农林大学学生科研训练项目(KX20180017)
详细信息
    作者简介: 胡欢(ORCID: 0000-0001-6807-1145),从事水稻转基因研究。E-mail: 1364213853@qq.com
    通信作者: 李飞飞(ORCID: 0000-0002-6233-4204),副教授,从事植物基因工程研究。E-mail: lifei-fei@163.com
  • 中图分类号: S336

Agrobacterium-mediated transformation of CP4 gene into indica rice

  • 摘要:   目的  建立籼稻‘中恢161’Oryza sativa subsp. indica ‘Zhonghui 161’农杆菌Agrobacterium tumefaciens介导的转化体系。  方法  以籼稻‘中恢161’的成熟胚为材料,设置了5个草甘膦质量浓度(100、200、300、400和500 mg·L−1)进行胚性愈伤组织的草甘膦敏感性试验。利用农杆菌介导法,将草甘膦抗性基因CP4-EPSPS导入‘中恢161’的胚性愈伤组织中,转化后的胚性愈伤组织分别在含有300、350和400 mg·L−1草甘膦的选择培养基上进行抗性筛选。抗性愈伤组织进一步分化、成苗。  结果  草甘膦质量浓度为300~400 mg·L−1时,愈伤组织褐化率约50%,具有很好的选择效果。经统计,300、350和400 mg·L−1草甘膦抗性筛选后,愈伤组织阳性率分别为40.16%、61.72%和84.04%,抗性愈伤组织的分化率为46.43%,成苗率为32.84%。共获得67株再生小苗,经PCR检测,43株成功转入CP4基因,再生植株阳性率为64.18%。  结论  建立了‘中恢161’农杆菌介导的转化体系。图5参20
  • 图  1  籼稻‘中恢161’胚性愈伤组织在不同质量浓度草甘膦培养基中培养20 d后褐化率

    Figure  1  Browning rate of O.sativa subsp.indica ‘Zhonghui 161’ callus cultured in different concentrations of glyphosate for 20 days

    图  2  籼稻‘中恢161’胚性愈伤组织在不同质量浓度草甘膦培养基中培养20 d后的褐化情况

    Figure  2  Browning rate of O. sativa subsp. indica ‘Zhonghui 161’ callus cultured in different concentrations of glyphosate for 20 days

    图  3  籼稻‘中恢161’再生植株CP4基因的PCR检测

    Figure  3  PCR result of CP4 gene from glyphosate-resistance plants

    图  4  CP4蛋白活性试纸条检测

    Figure  4  Protein activity of CP4 by strip test

    图  5  CP4基因转化籼稻‘中恢161’胚性愈伤组织的各个阶段

    Figure  5  Various stages of transforming CP4 gene into embryogenic callus of O.sativa subsp.indica ‘Zhonghui 161’

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出版历程
  • 收稿日期:  2020-07-07
  • 修回日期:  2020-12-10

农杆菌介导遗传转化获得转CP4基因籼稻的研究

doi: 10.11833/j.issn.2095-0756.20200436
    基金项目:  国家自然科学基金青年基金资助项目(31401461);浙江农林大学学生科研训练项目(KX20180017)
    作者简介:

    胡欢(ORCID: 0000-0001-6807-1145),从事水稻转基因研究。E-mail: 1364213853@qq.com

    通信作者: 李飞飞(ORCID: 0000-0002-6233-4204),副教授,从事植物基因工程研究。E-mail: lifei-fei@163.com
  • 中图分类号: S336

摘要:   目的  建立籼稻‘中恢161’Oryza sativa subsp. indica ‘Zhonghui 161’农杆菌Agrobacterium tumefaciens介导的转化体系。  方法  以籼稻‘中恢161’的成熟胚为材料,设置了5个草甘膦质量浓度(100、200、300、400和500 mg·L−1)进行胚性愈伤组织的草甘膦敏感性试验。利用农杆菌介导法,将草甘膦抗性基因CP4-EPSPS导入‘中恢161’的胚性愈伤组织中,转化后的胚性愈伤组织分别在含有300、350和400 mg·L−1草甘膦的选择培养基上进行抗性筛选。抗性愈伤组织进一步分化、成苗。  结果  草甘膦质量浓度为300~400 mg·L−1时,愈伤组织褐化率约50%,具有很好的选择效果。经统计,300、350和400 mg·L−1草甘膦抗性筛选后,愈伤组织阳性率分别为40.16%、61.72%和84.04%,抗性愈伤组织的分化率为46.43%,成苗率为32.84%。共获得67株再生小苗,经PCR检测,43株成功转入CP4基因,再生植株阳性率为64.18%。  结论  建立了‘中恢161’农杆菌介导的转化体系。图5参20

English Abstract

胡欢, 李媛, 丁筠, 曹含章, 吕尊富, 李飞飞. 农杆菌介导遗传转化获得转CP4基因籼稻的研究[J]. 浙江农林大学学报. doi: 10.11833/j.issn.2095-0756.20200436
引用本文: 胡欢, 李媛, 丁筠, 曹含章, 吕尊富, 李飞飞. 农杆菌介导遗传转化获得转CP4基因籼稻的研究[J]. 浙江农林大学学报. doi: 10.11833/j.issn.2095-0756.20200436
HU Huan, LI Yuan, DING Yun, CAO Hanzhang, LÜ Zunfu, LI Feifei. Agrobacterium-mediated transformation of CP4 gene into indica rice[J]. Journal of Zhejiang A&F University. doi: 10.11833/j.issn.2095-0756.20200436
Citation: HU Huan, LI Yuan, DING Yun, CAO Hanzhang, LÜ Zunfu, LI Feifei. Agrobacterium-mediated transformation of CP4 gene into indica rice[J]. Journal of Zhejiang A&F University. doi: 10.11833/j.issn.2095-0756.20200436

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