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彩叶桂品种群Osmanthus fragrans Colour Group是近年来新培育的桂花新类型,其营养体部分(即枝条和叶片)有着完全不同于绿色的明显色彩变异,并能够维持较长时间[1]。彩叶桂观赏期更长,园林用途更广泛,未来前景十分广阔。然而,由于低温的限制,目前彩叶桂的栽培主要局限于长江流域及以南地区,尚未得到有效的开发应用[2]。另外,迄今尚未有关于彩叶桂抗寒相关的系统研究,其抗寒品种的筛选和适宜种植的范围尚不明确,这也极大地限制了彩叶桂的推广和应用。低温是影响自然界植物正常生长和分布的一项关键因素[3],因此,研究低温对植物的影响具有重要的价值。低温环境中,植物细胞膜、渗透调节物质、抗氧化酶等都会产生一系列变化以抵御低温伤害。因此,通常采用相对电导率、丙二醛、可溶性糖、可溶性蛋白质、超氧化物歧化酶、过氧化物酶等生理指标作为评价植物抗寒性的参考依据[4-5]。本研究以6个不同彩叶桂品种为试验材料,通过测定其相对电导率、丙二醛质量摩尔浓度、可溶性糖质量分数、可溶性蛋白质质量分数、超氧化物歧化酶活性、过氧化物酶活性等6项生理指标的变化,探讨6种彩叶桂对低温胁迫的响应,完成部分彩叶桂的抗寒性评价。据此筛选适应北方地区露地栽培的优良彩叶桂品种,对彩叶桂的推广和应用具有一定的参考意义。
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材料均取自山东农业大学林学试验站。6个彩叶桂品种为‘傲霜’‘Aoshuang’、‘冬荣’‘Dongrong’、‘罗彩1号’‘Luocai No.1’、‘罗彩2号’‘Luocai No.2’、‘永福幻彩’‘Yongfu Huancai’、‘银碧双辉’‘Yinbi Shuanghui’。2019年11月中旬,选择各品种长势良好一致、无病虫害的4年生扦插苗,剪取1年生枝上第3~5节位大小均匀的叶片,用塑封袋装好置于冰盒带回实验室。
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将采回的叶片混匀,每个品种分成均匀的9份,设3次重复,洗净并吸干水分,将1组放置在25 ℃室温中进行对照处理,另外8组放置在可控温冰箱中,按照预设的8个温度梯度(即0、−4、−8、−12、−16、−20、−24、−28 ℃)给予人工低温处理。以隔10 min下降1 ℃的速度降温,降到目的温度后放置24 h,取出1组叶片在4 ℃冰箱中解冻8 h后测定。其余叶片继续按设定梯度处理。
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相对电导率的测定采用电导法[6],将各处理温度下的相对电导率和各处理温度的关系用Logistic方程进行拟合[7],当拟合度显著时计算拐点温度即半致死温度(TL50),可溶性糖质量分数的测定采用蒽酮法,可溶性蛋白质质量分数采用考马斯亮蓝比色法[8],丙二醛质量摩尔浓度采用硫代巴比妥酸法,超氧化物歧化酶活性采用NBT法,过氧化物酶活性采用愈创木酚法[9]。
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应用Excel 2016、SPSS 20.0软件进行数据分析,利用单因素方差分析(one-way ANOVA)和Duncan新复极差法(Duncan’s multiple-range)进行差异显著性分析,图表中数据为平均值±标准差;不同小写字母表示各品种内不同低温间在 P<0.05水平上具有显著性差异。
通过隶属函数法对6个彩叶桂品种的抗寒性进行综合性评价。隶属函数值计算公式:
$$ U\left( {{x_{i\!j}}} \right) = ({x_{i\!j}} - {x_{j\!\min }})/({x_{j\!\max }} - {x_j}_{\!\min })\text{;} $$ (1) $$ U\left( {{x_{i\!j}}} \right) = {\rm{ }}1 - ({x_{i\!j}} - {x_{j\!\min }})/({x_{j\!\max }} - {x_{j\!\min }})\text{。} $$ (2) 式(1)~(2)中:U(xij)为i品种j指标的隶属函数值;xij为测定值;xjmax和xjmin分别为j指标测定的最大值和最小值。式(1)用于计算指标与抗寒性呈正相关的情况,式(2)用于计算呈负相关的情况[10]。
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从图1可见:不同低温胁迫下6个彩叶桂品种相对电导率的变化趋势较为相似,都随温度的下降逐渐升高。在轻度低温胁迫时(0~−4 ℃),相对电导率升高较为缓慢,处于较低水平;随着温度的进一步下降(−4~−20 ℃),电导率表现快速增加的趋势。品种不同增幅不同。‘永福幻彩’幅度最小,是对照的6.16倍,‘傲霜’增加幅度最大,是对照的8.42倍,且各品种的相对电导率都已大于60%,说明此时已经出现了严重的离子渗透;降温后期(−20~−28 ℃),各品种相对电导率增加幅度很小,可见胁迫后期植物叶片细胞膜已受到相当严重破坏,几乎全部的离子都已渗透到细胞外,植株接近死亡。
图 1 低温胁迫下各品种叶片相对电导率变化
Figure 1. Changes of relative conducitivity in leaves of six cultivars of O. fragrans under cold stress
半致死温度(TL50)在一定程度上能反映植物不同品种的耐寒能力。对相对电导率数据进行 Logistic 回归分析(表1),相关系数均大于0.8,拟合度良好,结果可信。通过公式TL50=lna/b(a、b为回归方程的参数)计算半致死温度,不同品种彩叶桂抗寒性从大到小依次为‘傲霜’ ‘冬荣’ ‘罗彩2号’ ‘罗彩1号’ ‘永福幻彩’ ‘银碧双辉’。
表 1 低温胁迫下各品种叶片相对电导率的回归方程和半致死温度
Table 1. Regression equation of relative conductivity and TL50 in leaves of six cultivars of O. fragrans under cold stress
品种 Logistic方程 半致死温度/℃ 相关系数 ‘永福幻彩’ y=0.89/(1+5.80e0.18x) −9.94 0.831 9** ‘银碧双辉’ y =0.94/(1+7.15e0.24x) −8.15 0.989 0** ‘罗彩1号’ y =0.76/(1+12.33e0.23x) −10.77 0.844 0** ‘罗彩2号’ y =0.88/(1+14.55e0.24x) −11.24 0.972 3** ‘傲霜’ y =0.86/(1+6.86e0.15x) −12.95 0.981 9** ‘冬荣’ y =0.87/(1+8.70e0.18x) −11.80 0.982 7** 说明:x表示处理温度,y表示相对电导率。**表示在 0.01 水平上极显著相关 -
低温胁迫下,彩叶桂叶片丙二醛质量摩尔浓度随温度降低,总体上呈先增加后减少再增加的变化规律,并且各品种的变化幅度有所不同(图2)。0 ℃时叶片中丙二醛与对照相比显著上升,随即出现下降,仅‘傲霜’在0 ℃时出现短暂下降,随后又迅速上升,直到−12 ℃才又出现下降。随着胁迫的加深,各品种在降温后期丙二醛质量摩尔浓度再次呈上升趋势。上升幅度最大的为‘银碧双辉’,是对照的2.34倍,上升幅度最小的是‘傲霜’,是对照的0.88倍。
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在对彩叶桂叶片进行人工低温处理时,各品种可溶性糖、可溶性蛋白质质量分数总体上均表现出“升高—降低”的变化趋势,但增加幅度和拐点温度并不相同(图3和图4)。‘永福幻彩’可溶性糖拐点温度最低,为−12 ℃,‘银碧双辉’和‘冬荣’拐点温度最高,为0 ℃;可溶性糖增幅最大的是‘傲霜’,是对照的1.61倍,增幅最小的为‘银碧双辉’,是对照的1.06倍。‘罗彩1号’可溶性蛋白质拐点温度最低,为−12 ℃,‘永福幻彩’ ‘罗彩2号’拐点温度最高,为0 ℃;可溶性蛋白质增幅最大的是‘冬荣’,是对照的2.66倍,增幅最小的是‘罗彩2号’,是对照的1.15倍。总的来说,当彩叶桂受到一定范围的低温胁迫时,可溶性糖和可溶性蛋白质质量分数表现为增加,即2个指标和植物的耐寒能力存在一定的正相关。
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图5显示:随着低温胁迫强度增加,各品种超氧化物歧化酶活性变化趋势大体分“单峰”和“双峰”2种形式,但不同品种的峰值所对应的温度和增长幅度不同。‘罗彩1号’ ‘傲霜’叶片中超氧化物歧化酶活性呈现出“升—降—升—降”的双峰曲线。这2个品种第1个峰值所对应的温度均为−4 ℃,第2个峰值对应的温度分别为−12和−20 ℃;其余各品种均呈先上升后下降的单峰曲线,其中‘冬荣’峰值所对应的温度最低,为−12 ℃,‘永福幻彩’峰值所对应的温度较高,为0 ℃。各品种中,增幅最大的是‘罗彩1号’,是对照的2.17倍,增幅最小的是‘傲霜’,是对照的1.62倍。一般来说,低温胁迫会使植株超氧化物歧化酶活性提高,其增幅与植物自身耐寒能力高低具有正相关性。
图 5 低温胁迫下各品种叶片超氧化物歧化酶活性变化
Figure 5. Changes of SOD activity in leaves of six cultivars of O. fragrans under cold stress
图6显示:不同品种过氧化物酶活性随温度变化趋势也大致分为2种类型。‘永福幻彩’ ‘银碧双辉’大致呈“上升—下降”的趋势,两者达到最大值时临界温度均为−8 ℃,但增幅各不相同,峰值时的过氧化物酶活性分别是对照的3.03、4.69倍;‘罗彩1号’ ‘罗彩2号’ ‘傲霜’ ‘冬荣’过氧化物酶活性呈“下降—上升—下降”的趋势,在0 ℃时过氧化物酶活性均出现短暂下降,随后立即上升,分别在−4、−8、−4、−12 ℃时达到最大值,此时过氧化物酶活性分别是对照的1.12、1.42、1.31、1.19、1.15倍;当温度进一步降低时(−12~−28 ℃),各品种过氧化物酶活性又出现大幅度下降。一般来说,过氧化物酶活性的上升幅度与植物的耐寒能力正相关。
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采用Excel 2016,依据隶属函数计算公式得出6个品种各指标的隶属函数值,并取平均值,通过比较隶属函数平均值大小得出6个品种的抗寒性从强到弱依次为 ‘傲霜’ ‘冬荣’ ‘罗彩2号’ ‘罗彩1号’ ‘永福幻彩’ ‘银碧双辉’(表2)。
表 2 6个彩叶桂品种抗寒性综合评价
Table 2. Comprehensive evaluation of cold resistance of six cultivars of O. fragrans
品种 隶属函数值 平均值 排序 电导率 超氧化物歧化酶 过氧化物酶 丙二醛 可溶性蛋白质 可溶性糖 ‘永福幻彩’ 0.461 6 0.401 8 0.285 2 0.607 8 0.288 8 0.316 2 0.393 6 5 ‘银碧双辉’ 0.417 5 0.410 7 0.156 9 0.586 0 0.222 7 0.487 1 0.380 2 6 ‘罗彩1号’ 0.577 2 0.575 3 0.539 3 0.326 5 0.292 5 0.586 1 0.482 8 4 ‘罗彩2号’ 0.544 4 0.585 1 0.579 4 0.362 4 0.412 6 0.636 4 0.520 1 3 ‘傲霜’ 0.599 3 0.693 6 0.537 3 0.700 8 0.406 7 0.593 1 0.588 5 1 ‘冬荣’ 0.563 2 0.687 3 0.558 2 0.697 0 0.390 3 0.618 5 0.585 8 2
Physiological responses and evalution of cold resistance of six Osmanthus fragrans cultivars under low temperature stress
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摘要:
目的 研究6个彩叶桂Osmanthus fragrans品种对低温胁迫的生理响应,并进行抗寒性评价,以利于彩叶桂的推广和应用。 方法 以6个彩叶桂品种离体叶片为材料,进行人工低温胁迫,共设0、−4、−8、−12、−16、−20、−24、−28 ℃共8个温度梯度,测定其相对电导率、丙二醛质量摩尔浓度、可溶性糖质量分数、可溶性蛋白质质量分数、超氧化物歧化酶活性、过氧化物酶活性等6项生理指标,结合隶属函数法,探讨几种彩叶桂对低温胁迫的响应,进行抗寒性评价。 结果 不同低温胁迫下6个彩叶桂品种的相对电导率的变化均为“S”型曲线,Logisitic回归分析可知:‘傲霜’‘Aoshuang’、‘冬荣’‘Dongrong’半致死温度较低,分别为−12.95、−11.80 ℃;‘银碧双辉’‘Yinbi Shuanghui’最高,为−8.15 ℃。低温胁迫下,彩叶桂叶片丙二醛质量摩尔浓度随温度降低,总体上呈先增加后减少再增加的变化规律,并且各品种的变化幅度有所不同。随温度的降低,各品种可溶性糖、可溶性蛋白质质量分数总体上均为先升后降,但增加幅度和拐点温度并不相同。‘罗彩1号’ ‘Luocai No.1’、‘傲霜’超氧化物歧化酶活性表现出“上升—下降—再上升—再下降”的趋势,其余品种超氧化物歧酶活性变化均呈先升后降的趋势。不同品种过氧化物酶活性的变化趋势不尽相同,‘永福幻彩’ ‘Yongfu Huancai’、‘银碧双辉’大致呈现先上升后下降的趋势,‘罗彩1号’、‘罗彩2号’‘Luocai No.2’、‘傲霜’、‘冬荣’过氧化物酶活性呈“下降—上升—下降”的趋势。抗寒性评价可知:6个品种抗寒能力从强到弱依次为‘傲霜’、‘冬荣’、‘罗彩2号’、‘罗彩1号’、‘永福幻彩’、‘银碧双辉’。 结论 低温胁迫条件下,6个彩叶桂品种叶片生理生化指标均发生了明显的变化,综合来看,‘傲霜’‘冬荣’‘罗彩2号’这3个品种较能适应北方气候。图6表2参35 Abstract:Objective The objective of this study is to investigate the physiological response of six cultivars of Osmanthus fragrans to low temperature stress and evaluate their cold resistance, so as to facilitate their popularization and application. Method The detached leaves of six cultivars of O. fragrans were used as experimental materials under artificial low temperature stress, with a total of 8 temperature gradients of 0, −4, −8, −12, −16, −20, −24, −28 ℃. Their physiological indexes such as relative conductivity (REC), malondialdehyde (MDA), soluble sugar (SS), soluble protein (SP), superoxide dismutase (SOD) and peroxisome (POD) were measured. The response of several cultivars of O. fragrans to low temperature stress was studied by the membership function method, and the cold resistance evaluation was completed. Result The changes of REC of six cultivars under different low temperature stress were S-shaped curve. Combined with logistic regression analysis, the semi-lethal temperature of each cultivar was calculated. ‘Aoshuang’ and ‘Dongrong’ had lower values, which were −12.95 and −11.80 ℃ respectively, and ‘Yinbi Shuanghui’ had the highest value of −8.15 ℃. Under low temperature stress, the MDA content in leaves of six cultivars of O. fragrans increased first, then decreased and then increased with the decrease of temperature, and the rangeability of each cultivar was different. With the decrease of temperature, the content of SS and SP of all cultivars increased first and then decreased, but the increasing range and inflection point temperature were not the same. The SOD activity of ‘Luocai No.1’ and ‘Aoshuang’ showed a trend of “up–down–up–down”, while the SOD activity of other cultivars showed a trend of first up and then down. The change trend of POD activity in different cultivars was different. The POD activity of ‘Yongfu Huancai’ and ‘Yinbi Shuanghui’ generally showed an upward trend at first and then a downward trend, and the POD activity of ‘Luocai No.1’, ‘Luocai No.2’, ‘Aoshuang’ and ‘Dongrong’ showed a trend of “down–up–down”. The cold resistance of six cultivars was evaluated by the membership function method, and the order of cold resistance from strong to weak was ‘Aoshuang’, ‘Dongrong’, ‘Luocai No.2’, ‘Luocai No.1’, ‘Yongfu Huancai’, and ‘Yinbi Shuanghui’. Conclusion Under low temperature stress, the physiological and biochemical indexes of leaves of six cultivars of O. fragrans change significantly. According to the membership function method, the three cultivars ‘Aoshuang’, ‘Dongrong’, and ‘Luocai No.2’ can better adapt to the temperature in northern China. [Ch, 6 fig. 2 tab. 35 ref.] -
Key words:
- botany /
- Osmanthus fragrans /
- low temperature stress /
- physiological index /
- cold resistance evaluation
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表 1 低温胁迫下各品种叶片相对电导率的回归方程和半致死温度
Table 1. Regression equation of relative conductivity and TL50 in leaves of six cultivars of O. fragrans under cold stress
品种 Logistic方程 半致死温度/℃ 相关系数 ‘永福幻彩’ y=0.89/(1+5.80e0.18x) −9.94 0.831 9** ‘银碧双辉’ y =0.94/(1+7.15e0.24x) −8.15 0.989 0** ‘罗彩1号’ y =0.76/(1+12.33e0.23x) −10.77 0.844 0** ‘罗彩2号’ y =0.88/(1+14.55e0.24x) −11.24 0.972 3** ‘傲霜’ y =0.86/(1+6.86e0.15x) −12.95 0.981 9** ‘冬荣’ y =0.87/(1+8.70e0.18x) −11.80 0.982 7** 说明:x表示处理温度,y表示相对电导率。**表示在 0.01 水平上极显著相关 表 2 6个彩叶桂品种抗寒性综合评价
Table 2. Comprehensive evaluation of cold resistance of six cultivars of O. fragrans
品种 隶属函数值 平均值 排序 电导率 超氧化物歧化酶 过氧化物酶 丙二醛 可溶性蛋白质 可溶性糖 ‘永福幻彩’ 0.461 6 0.401 8 0.285 2 0.607 8 0.288 8 0.316 2 0.393 6 5 ‘银碧双辉’ 0.417 5 0.410 7 0.156 9 0.586 0 0.222 7 0.487 1 0.380 2 6 ‘罗彩1号’ 0.577 2 0.575 3 0.539 3 0.326 5 0.292 5 0.586 1 0.482 8 4 ‘罗彩2号’ 0.544 4 0.585 1 0.579 4 0.362 4 0.412 6 0.636 4 0.520 1 3 ‘傲霜’ 0.599 3 0.693 6 0.537 3 0.700 8 0.406 7 0.593 1 0.588 5 1 ‘冬荣’ 0.563 2 0.687 3 0.558 2 0.697 0 0.390 3 0.618 5 0.585 8 2 -
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https://zlxb.zafu.edu.cn/article/doi/10.11833/j.issn.2095-0756.20200606