旱柳SRAP－PCR体系的建立与优化

王红玲; 张珏; 教忠意; 隋德宗

doi:10.11833/j.issn.2095-0756.2010.06.024

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旱柳SRAP－PCR体系的建立与优化

王红玲 , 张珏 , 教忠意 , 隋德宗

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王红玲, 张珏, 教忠意, 隋德宗. 旱柳SRAP－PCR体系的建立与优化[J]. 浙江农林大学学报, 2010, 27(6): 945-949. doi: 10.11833/j.issn.2095-0756.2010.06.024

引用本文:

王红玲, 张珏, 教忠意, 隋德宗. 旱柳SRAP－PCR体系的建立与优化[J]. 浙江农林大学学报, 2010, 27(6): 945-949. doi: 10.11833/j.issn.2095-0756.2010.06.024

WANG Hong－ling, ZHANG Jue, JIAO Zhong－yi, SHI De－zong. Establishing and optimizing the SRAP－PCR system for Salix matsudana[J]. Journal of Zhejiang A&F University, 2010, 27(6): 945-949. doi: 10.11833/j.issn.2095-0756.2010.06.024

Citation:

WANG Hong－ling, ZHANG Jue, JIAO Zhong－yi, SHI De－zong. Establishing and optimizing the SRAP－PCR system for Salix matsudana[J]. Journal of Zhejiang A&F University, 2010, 27(6): 945-949. doi: 10.11833/j.issn.2095-0756.2010.06.024

旱柳SRAP－PCR体系的建立与优化

doi: 10.11833/j.issn.2095-0756.2010.06.024

1.
江苏省林业科学研究院，江苏南京 211153

详细信息

通信作者: 王红玲

Establishing and optimizing the SRAP－PCR system for Salix matsudana

1.
Forest Research Institute of Jiangsu Province，Nanjing 211153，Jiangsu，China

More Information

Corresponding author: WANG Hong－ling

摘要: 为了丰富柳树分子标记的手段，以旱柳Salix matsudana为材料，通过正交实验设计法，获得适于旱柳的相关序列扩增多态性（sequence-related amplified polymorphism，SRAP）-聚合酶链式反应（polymerase chain reaction，PCR）体系；对SRAP-PCR扩增过程中的2次退火温度进行优化。结果如下：优化反应体系，25.00 L反应液中，含20.84 nkat的Taq酶，2.00 L Mg2+（25 .00 mmolL－1），2.50 L 碱基混合物（脱氧核糖核苷酸dNTPs，各2.50 mmolL－1），1.50 L引物（20.00 molL－1），100.00 ng DNA模板，2.50 L 10 Taq酶缓冲液。扩增程序，94 ℃ 2.0 min；94 ℃ 1.0 min，38 ℃ 1.0 min，72 ℃ 1.5 min，5个循环；94 ℃ 1.0min，54 ℃ 1.0 min，72 ℃ 1.5 min，30个循环；72 ℃ 10.0 min。经聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）检测，特征性条带清晰，信息量大，完全可以用于旱柳基因组的研究分析。图4表2参12
- 林木育种学 /
- 旱柳 /
- 相关序列扩增多态性（SRAP） /
- 正交实验设计
Abstract: To enrich the molecular marker method for willow trees，an improved reaction system from a sequence－related amplified polymorphism－polymerase chain reaction （SRAP－PCR） of Salix matsudana（Hankow willow） was obtained with an orthogonal design. In addition，the temperatures for two annealing methods were optimized in the PCR amplifier and a polyacrylamide gel electrophoresis（PAGE） was employed. Results showed that the reaction system was 20.84 nkat Taq，2.00 L Mg2+（25.00 mmolL-1），2.50 L deoxyribonucleotide triphosphates （dNTPs）（2.50 mmolL-1 each），1.50 L primer（20.00 molL-1），100.00 ng template，and 2.50 L 10 Taq buffer in 25.00 L. The program was as follows：94 ℃ for 2.0 min；then，for 5 cycles，94 ℃ for 1.0 min，38 ℃ for 1.0 min，and 72 ℃ for 1.5 min；next，at 30 cycles，94 ℃ for 1.0 min，54 ℃ for 1.0 min，and 72 ℃ for 1.5 min；and finally 72 ℃ for 10.0 min. Results of PAGE showed that clarity and amount of information increased with the new procedure. Thus，this superior method could be used for research on S. matsudana.［Ch，4 fig. 2 tab. 12 ref.］
- forest tree breeding /
- Salix matsudana /
- SRAP /
- orthogonal design

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链接本文:
https://zlxb.zafu.edu.cn/article/doi/10.11833/j.issn.2095-0756.2010.06.024

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旱柳SRAP－PCR体系的建立与优化

doi: 10.11833/j.issn.2095-0756.2010.06.024

1. 江苏省林业科学研究院，江苏南京 211153

通信作者: 王红玲

刊出日期: 2010-12-20

关键词:

摘要: 为了丰富柳树分子标记的手段，以旱柳Salix matsudana为材料，通过正交实验设计法，获得适于旱柳的相关序列扩增多态性（sequence-related amplified polymorphism，SRAP）-聚合酶链式反应（polymerase chain reaction，PCR）体系；对SRAP-PCR扩增过程中的2次退火温度进行优化。结果如下：优化反应体系，25.00 L反应液中，含20.84 nkat的Taq酶，2.00 L Mg2+（25 .00 mmolL－1），2.50 L 碱基混合物（脱氧核糖核苷酸dNTPs，各2.50 mmolL－1），1.50 L引物（20.00 molL－1），100.00 ng DNA模板，2.50 L 10 Taq酶缓冲液。扩增程序，94 ℃ 2.0 min；94 ℃ 1.0 min，38 ℃ 1.0 min，72 ℃ 1.5 min，5个循环；94 ℃ 1.0min，54 ℃ 1.0 min，72 ℃ 1.5 min，30个循环；72 ℃ 10.0 min。经聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）检测，特征性条带清晰，信息量大，完全可以用于旱柳基因组的研究分析。图4表2参12