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枳椇Hovenia acerba是鼠李科Rhamnaceae枳椇属Hovenia高大落叶乔木，俗称拐枣。枳椇果实利用价值高，其果梗质量占果实总质量的90%。枳椇果梗肥大、肉质多汁、营养丰富，具很高的食用价值[1−6]。光叶毛果枳椇H. trichocarpa var. robusta为枳椇属的变种[7]。叶下面无毛或沿脉被疏柔毛，萼片和果实被锈色密绒毛。肥大果梗含丰富糖，可生食、酿酒、制醋和熬糖等[2, 8]。枳椇果梗是主要食用部位，其滋味主要由非挥发性代谢物主导，不同种枳椇果梗常呈不同风味[1]。卢孟飞等[1]通过比较主栽枳椇品种果梗的营养成分差异发现：不同枳椇品种果梗营养成分和内在品质存在显著差异。因此，为更好地利用枳椇不同种及品种，需对其开展代谢物分析和评价。
广泛靶向代谢组学是一种高通量、高精度和广覆盖的代谢产物检测方法，在茶树Camellia sinensis[9−12]、草莓Fragaria × ananassa[13]、玉米Zea mays[14]和黄纹早竹Phyllostachys violascens var. flavistriatus[15]等植物的化学成分和品质特征研究中应用广泛。PENG等[16]采用LC-ESI-QTOF-MS/MS技术对枳椇果梗进行测定，发现枳椇果梗的抗氧化活性与酚类、单宁酸总质量分数呈正相关，表明酚类物质可能是枳椇果梗抗氧化活性的主要成分，且首次鉴定出枳椇果梗提取物中含有低聚糖、有机酸、脂肪酸和黄酮类等影响风味的化合物。YANG等[17]通过定量分析发现：枳椇果肉的主要营养成分包括糖类、蛋白质、脂质和黄酮等化合物，且糖类十分丰富。
目前，对枳椇研究集中于果梗的代谢物提取和功能食品的开发利用等[17−18]，但对枳椇不同种的全面分析报道较少。诸多研究表明：代谢组学可对植物各器官内含物质进行准确解析，并筛选不同种或品种的特征化合物。因此，本研究以枳椇和光叶毛果枳椇果梗为试验材料，通过广泛靶向代谢组学鉴定2种枳椇果梗的代谢物差异，为枳椇种特征化合物的提取与利用及优良品种的选育提供参考。
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材料选自浙江省丽水市白云山的枳椇和光叶毛果枳椇。枳椇浆果状核果，近球形，无毛(图1A)；光叶毛果枳椇浆果状核果，近球形，密被锈色或棕色绒毛(图1B)。2023年11月13日，在2种枳椇树的东、西、南、北4个方位，分别采集完全成熟的果梗，均匀混合后液氮速冻，−80 ℃保存。在液氮环境下用植物粉碎机粉碎，真空冷冻干燥后用于广泛靶向代谢组学测定。
图 1 2种枳椇属植物的果实表型
Figure 1. Fruit phenotypes of two Hovenia species
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称取50 mg样品粉末，溶解于
1200 μL提取液(−20 ℃预冷的体积分数为70%的甲醇水内标提取液)；涡旋6次，每次间隔30 min，每次30 s；离心3 min (12 000 r·min−1，4 ℃)，吸取上清液，用0.22 μm微孔滤膜过滤样品，保存于进样瓶，进行超高效液相色谱(UPLC，ExionLC™ AD)和串联质谱(MS/MS，QTRAP® 6500+)分析。色谱条件：Agilent SB-C18 1.8 µm，2.1 mm×100.0 mm，流速0.35 mL·min−1；柱温40 ℃；进样量2 μL。流动相条件：流动相A为超纯水(加入体积分数为0.1%的甲酸)，流动相B为乙腈(加入体积分数为0.1%的甲酸)。
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使用Analyst 1.6.3软件分析质谱数据中的代谢物，得到代谢物列表，包括代谢物名称和丰度。利用KEGG数据库(
https://www.metaboanalyst.ca )对鉴定到的代谢物进行功能和分类注释。使用SIMCA 14.1软件对代谢物进行主成分分析(PCA)和正交偏最小二乘判别分析(OPLS-DA)。其中OPLS-DA 的S-plot图用于识别和解释模型中重要变量的关系，位于右上角和左下角的变量表示其差异显著，红色点通常表示分组贡献值(VIP)≥1的变量，而绿色点表示VIP＜1的变量。根据VIP和组间变化的显著性筛选得到差异代谢物。再应用排列检验(permutation test)验证OPLS-DA模型可靠性，通过随机打乱样本的分组标签，重新建立和评估模型，以此来确定模型可靠性，R2为模型的解释率，代表了模型的可解释性，即模型中有多少信息能被解释。其中：R2X表示模型对预测变量(X矩阵)的解释程度；R2Y表示模型对响应变量(Y矩阵)的解释程度；Q2表示模型的预测能力，Q2＞0.5被认为是好模型。使用Excel 2019软件对数据进行标准化处理和t检验。接着通过t检验计算得到2组样品间的P值，筛选显著性差异代谢物。使用KEGG对差异代谢物进行通路分析，得到差异代谢通路的富集结果。在本研究中，VIP为变量重要性投影值，表示代谢物对分组的贡献。log2FC表征差异倍数，为每个代谢物在样本组与对照组中3个重复均值的比值，正值表示样本组中代谢物相对含量高于对照组，负值则相反。P值用于判断实验结果的显著性。数据标准化计算公式为：
$$ z=\frac{(x-\mu )}{\sigma }。 $$ 其中：x 是原始数据，μ 是数据的均值，σ 是数据的标准差。
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对2种枳椇果梗样品进行UPLC-MS/MS分析，共鉴定出13类1 810种代谢物(图2)，包括黄酮类307种(16.96%)、生物碱195种(10.77%)、脂类221种(12.21%)、有机酸65种(3.59%)、萜类191种(10.55%)、单宁13种(0.72%)、甾体1种(0.06%)、醌类18种(0.99%)、酚酸类207种(11.44%)、氨基酸及其衍生物146种(8.07%)、核苷酸及其衍生物54种(2.98%)、木脂素和香豆素130种(7.18%)以及其他代谢物262种(14.48%)。
图 2 2种枳椇属植物果梗代谢物分类
Figure 2. Metabolite classification of fruit pedicels in two Hovenia species
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为揭示2种枳椇果梗的代谢物组成差异，采用多维模式识别方法对代谢组数据进行多元统计分析。主成分分析得分表明：2组样品的3个重复良好，代谢组学数据质量可靠(图3A)。PC1和PC2分别解释了总变量的52.9%和14.9%，累计贡献率达67.8%。来自2组的样品表现出明显分层，并在第一主成分上分离显著，表明2组样品的代谢物在组间差异显著。载荷分析确定各代谢物与2个种之间存在相关性(图3B)。
图 3 2种枳椇属植物果梗PCA得分图(A)和载荷图(B)
Figure 3. PCA score diagram (A) and loading diagram (B) of fruit pedicels in two Hovenia species
OPLS-DA分析表明：第一主成分和第二主成分的贡献率分别为57.7%和13.7%，累计贡献率为71.4%，可更好地解释总体变量(图4A)。R2X=0.775，R2Y=0.998，Q2=0.972，其中Q2＞0.9表明模型可靠(图4B)。S-plot图表示主成分与代谢物的相关系数，可通过变量重要性投影值(VIP)筛选差异代谢物(图4C)。
图 4 2种枳椇属植物果梗OPLS-DA图(A)、排序检验图(B)和S-plot图(C)
Figure 4. OPLS-DA score plot (A), ranked test plot (B) and S-plot (C) of fruit pedicels in two Hovenia species
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为研究枳椇和光叶毛果枳椇果梗的代谢物差异，以VIP＞1、|log2FC|＞1和P＜0.05为标准筛选出782种差异代谢物。与枳椇果梗相比，378种代谢物在光叶毛果枳椇果梗中显著上调，404种代谢物显著下调(P＜0.05，图5A)。为更好地了解差异代谢物种类，对筛选的差异代谢物进行标准化处理，并根据代谢物种类进行聚类分析(图5B)。结果表明：782种差异代谢物中，黄酮和酚酸类种类最多，分别为140和102种，其次为萜类95种、生物碱89种、木脂素和香豆素75种、脂类70种、氨基酸及其衍生物56种、核苷酸及其衍生物27种、有机酸22种、单宁4种、醌类4种和其他类98种。与枳椇果梗相比，单宁、醌类代谢物相对含量在光叶毛果枳椇果梗中显著下调(P＜0.05，图5C)。
图 5 2种枳椇属植物果梗差异代谢物火山图(A)、差异代谢物聚类热图(B)和差异代谢物散点图(C)
Figure 5. Differential metabolite volcano plot (A), differential metabolite clustering heat map (B) and differential metabolite scatter plot (C) of fruit pedicels in two Hovenia species
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为进一步预测差异代谢物的主要生物学功能，将枳椇和光叶毛果枳椇果梗的差异代谢物注释到KEGG数据库，差异代谢物的代谢通路富集分析筛选到3条差异显著的代谢通路(图6)，每条通路中富集的代谢物如表1所示。差异显著的代谢物主要富集在苯丙烷类化合物、黄酮类化合物和异喹啉生物碱的生物合成途径(图7)。在这3条代谢通路中，黄酮类化合物生物合成途径富集的差异代谢物在枳椇果梗中的相对含量显著高于光叶毛果枳椇果梗(P＜0.05)；在苯丙烷类化合物生物合成途径中，除了芥子醛外，其他富集的差异代谢物在光叶毛果枳椇果梗中的相对含量均显著高于枳椇果梗(P＜0.05)；在异喹啉生物碱生物合成途径中，除了番荔枝碱外，其他富集的差异代谢物在光叶毛果枳椇果梗中的相对含量均显著高于枳椇果梗(P＜0.05)。
图 6 2种枳椇属植物果梗差异代谢物的富集通路气泡图
Figure 6. Enrichment pathway bubble diagram of fruit pedicels in two Hovenia species
表 1 2种枳椇属植物果梗差异代谢物显著富集通路
Table 1. Metabolites significantly enriched pathways of fruit pedicels in two Hovenia species
通路 通路名称 富集的代谢物名称 Map00940 苯丙烷类化合物生物合成 咖啡酰奎宁酸、对香豆酸、芥子醛、芥子酸、咖啡酸、阿魏酸 Map00941 黄酮类化合物生物合成 咖啡酰奎宁酸、柚皮素查耳酮、柚皮素、3, 4, 2’, 4’, 6’-五羟基查耳酮-4’-O-葡萄糖苷、樱桃苷、
3, 4, 2’, 4’, 6’-五羟基查耳酮、3’, 4, 4’, 5, 7-五羟基黄烷、短叶松素、圣草酚、根皮苷、
白矢车菊素Map00950 异喹啉生物碱生物合成 甲基衡州乌药碱、N-甲基乌药碱、异波尔定碱、华青藤碱、乌药碱、原儿茶醛、
对香豆酸、番荔枝碱
图 7 2种枳椇属植物果梗代谢差异中苯丙烷类化合物、黄酮类化合物和异喹啉生物碱的生物合成通路及相对含量差异
Figure 7. Biosynthesis pathways and contents of phenylpropanoid, flavonoid and isoquinoline alkaloid in fruit pedicels from two Hovenia species
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本研究对枳椇果梗和光叶毛果枳椇果梗进行广泛靶向代谢组学分析，以探究2种枳椇属植物果梗的代谢物差异，共鉴定出1 810种代谢物，其中枳椇果梗中化合物数量最多的三类分别是黄酮类、脂类和酚酸类化合物。KEGG代谢通路分析发现：2种枳椇果梗差异代谢物苯丙烷类化合物、黄酮类化合物和异喹啉生物碱的生物合成通路富集程度最高。前人研究表明：乌药碱、甲基衡州乌药碱和N-甲基乌药碱等生物碱化合物具有显著镇痛效果[19−20]，在临床上被用于缓解疼痛，且具有抗炎、抗高血脂和抗肿瘤等多种药理作用[21]。柚皮素、查尔酮等黄酮类化合物亦具有多种生物活性和药理作用，如较强抗氧化性和抗菌性[22−25]，且查尔酮等黄酮类化合物还具有高甜度和低热量[26]，可作为食品甜味剂。本研究发现：乌药碱、甲基衡州乌药碱和N-甲基乌药碱等生物碱化合物在光叶毛果枳椇果梗中显著上调，而查耳酮、柚皮素和2’, 3, 4, 4’, 6’-五羟基查耳酮等黄酮化合物在枳椇果梗中显著上调。因此，2种枳椇属植物果梗在潜在应用领域可能存在差异，需进行分类加工利用。
目前，枳椇的应用不再局限于果汁、果酒类产品[27]，更多聚焦于果梗中多糖、黄酮和酚酸类化合物的提取和功能性研究[28−31]。例如，黄酮类化合物具有抗菌性[27]，枳椇花粉提取物和茎、叶提取物可抑制粪肠球菌Enterococcus faecalis介导的炎症和丙酸杆菌 Cutibacterium acnes引起的痤疮[32−33]。本研究发现：枳椇果梗黄酮类化合物相对含量比光叶毛果枳椇果梗更高，更适合用于提取黄酮类化合物。然而，目前对于枳椇果梗黄酮类化合物抗菌性的研究及其提取物在抗菌上的应用尚欠缺。单宁、醌类具多样生物活性，可用于抗菌和抗病毒作用[34−36]，但也存在潜在危害，例如，较高水平的单宁可与消化酶结合，影响消化功能[37]，且可与蛋白质形成不溶性复合物，可能会干扰蛋白质和其他营养元素的吸收[38]。部分醌类物质可能对肾脏、肝脏有损害[39]，还被认为具有致癌作用[40−41]。因此，在开发利用枳椇产品时，需进行充分的安全性评价。
本研究表明，苯丙烷类化合物、黄酮类化合物和异喹啉生物碱的生物合成途径是2种枳椇果梗中差异最显著的3条代谢通路，且多种中间产物也存在显著差异。这些差异代谢物与果梗感官差异的关系还需更多试验解析。
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同一生态条件下，2种枳椇果梗的代谢谱存在显著差异，特别是具有药用价值和高甜度的生物碱和黄酮类代谢产物相对含量。这可能与2种枳椇果梗感官质量差异的形成有一定关系。本研究结果可为2种枳椇属植物的特征化合物提取与利用及优良品种的选育提供理论支撑。
Comprehensive targeted metabolomic analysis of fruit stalks in two species of Hovenia plants
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摘要:
目的 阐明枳椇Hovenia acerba和光叶毛果枳椇H. trichocarpa var. robusta果梗的代谢物差异，为枳椇属Hovenia植物的开发利用奠定基础。 方法 通过高效液相色谱-串联质谱(HPLC-MS/MS)的广泛靶向代谢组学方法，分析枳椇和光叶毛果枳椇果梗中代谢产物和代谢通路的差异。 结果 2种枳椇属植物果梗中共检测到1 810种代谢物，其中显著差异代谢物782种(P＜0.05)。与枳椇果梗相比，光叶毛果枳椇果梗中上调差异代谢物有378种，下调差异代谢物有404种，且单宁、醌类代谢物相对含量均显著下调(P＜0.05)。2种枳椇属植物果梗中差异代谢物主要富集在苯丙烷类化合物、黄酮类化合物和异喹啉生物碱的生物合成途径，其中极显著差异代谢物包含乌药碱、N-甲基乌药碱和甲基衡州乌药碱等生物碱物质以及柚皮素、柚皮素查尔酮和2’, 3, 4, 4’, 6’-五羟基查耳酮等黄酮类产物。 结论 同一生态条件下，2种枳椇果梗的代谢谱存在显著差异，特别是具有药用价值和高甜度的生物碱和黄酮类代谢产物相对含量存在显著差异。图7表1参41 Abstract:Objective This study aims to clarify the metabolite differences in the fruit stalks of Hovenia acerba and H. trichocarpavar var. robusta, and lays a foundation for the development and utilization of Hovenia plants. Method Through a comprehensive targeted metabolomics approach of high-performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry (HPLC-MS/MS), the differences in metabolites and metabolic pathways in the fruit stalks of H. acerba and H. trichocarpa var. robusta were analyzed. Result A total of 1810 metabolites were detected in the fruit stalks of the two Hovenia species, of which 782 metabolites showed significant differences (P＜0.05). Compared with the fruit stalks of H. acerba, there were 378 up-regulated differential metabolites and 404 down-regulated differential metabolites in the fruit stalks of H. trichocarpa var. robusta, and the relative contents of tannin and quinone metabolites were significantly down-regulated. The differential metabolites in the fruit stalks of the two Hovenia species were primarily enriched in the biosynthetic pathways of phenylalanine compounds, flavonoids, and isoquinoline alkaloids. Among them, the extremely significant differential metabolites included alkaloid substances such as ligustroside, N-methylligustroside and methylcoclaurine, as well as flavonoids like naringin, naringin chalcone, and 2’, 3, 4, 4’, 6’-pentahydroxy chalcone.Conclusion There are significant differences in the metabolic profiles of the fruit stalks of the two Hovenia species under the same ecological conditions, especially the relative content of alkaloids and flavonoids with medicinal value and high sweetness. [Ch, 7 fig. 1 tab. 41 ref.] -
Key words:
- Hovenia /
- comprehensive targeted metabolome /
- fruit stalk /
- alkaloid /
- flavonoid compound
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九龙山国家级自然保护区位于浙江省遂昌县西南部，与福建浦城县、浙江龙泉市接壤，总面积55.25 km2。1983 年建立，2003年升级为国家级自然保护区。保护区以黑麂Muntiacus crinifrons、黄腹角雉Tragopan caboti、伯乐树Bretschneidera sinensis和南方红豆杉Taxus mairei等珍稀野生动植物和典型的中亚热带森林生态系统为主要保护对象[1]。潘金贵等[2]结合早期研究对九龙山自然保护区的鸟类进行了全面汇总，共记录到鸟类143种；郑伟成等[1]在2012−2013年利用红外相机监测法调查保护区内鸟兽多样性，记录到鸟类10种。本研究整合了以上来源的鸟类调查记录，在此基础上结合本次调查，分析保护区内鸟类组成特征，为研究区鸟类保护和恢复提供科学依据。
1. 研究方法
通过鸟类专项调查活动[2]和红外相机监测记录[1]收集九龙山国家级自然保护区鸟类的历史数据；通过样线法和红外相机监测记录2016−2018年保护区鸟类调查数据。
固定距离样线法在2016−2018年繁殖季(5−8月)和越冬季(10月至次年1月)分别进行，共设置8条样线，每个季度由不同组合的观测者在1周内对每条样线进行1次(2017年繁殖季及以前)或3次(2017越冬季及以后)调查，其中屁股窟、大岩前2条样线仅在2017年越冬季和2018年繁殖季进行调查(表1)。样线单侧宽度为25 m，步行调查，平均速度为2 km·h−1，调查时间为6:00−11:00和15:00−17:00。红外相机监测法在2016年11月至2018年3月进行，以自然保护区地形图为基础将整个调查区域划出1 km×1 km的网格图，每1 km2放置1台，共63台进行网格化监测，累积有效工作时长为22 440个工作日。
表 1 九龙山国家级自然保护区鸟类群落调查样线Table 1 Transect lines of bird community survey in Jiulongshan National Nature Reserve样线 起点 终点 长度/km 坐标 海拔/m 坐标 海拔/m 外九龙 28°22′22.16″N，118°53′26.66″E 703 28°21′53.70″N，118°52′41.38″E 1 149 2.13 游步道 28°23′35.96″N，118°50′43.98″E 525 28°22′53.55″N，118°50′55.82″E 661 3.09 内北坪 28°21′15.67″N，118°51′20.60″E 1 072 28°20′46.51″N，118°51′02.86″E 1 297 2.26 中心坑 28°22′34.91″N，118°53′32.01″E 676 28°22′06.93″N，118°53′46.71″E 979 1.84 上廖坑 28°22′05.57″N，118°51′27.68″E 765 28°22′33.15″N，118°52′01.06″E 1 082 2.18 考坑 28°23′19.99″N，118°50′38.34″E 545 28°23′06.64″N，118°50′10.83″E 802 1.78 屁股窟 28°22′52.72″N，118°53′21.69″E 621 28°23′15.47″N，118°53′30.10″E 756 1.75 大岩前 28°22′32.32″N，118°53′28.91″E 667 28°21′39.10″N，118°53′29.42″E 1 143 1.88 鸟类分类系统的修订和居留型划分参照《中国鸟类分类与分布名录》[3]。地理型划分依据虞快等[4]、张荣祖[5]、诸葛阳[6]方法进行。IUCN濒危物种红色名录按照IUCN Red List (
https://www.iucnredlist.org/ )标准；中国鸟类红色名录按照中国脊椎动物红色名录[7]。2016−2018年样线法调查到的鸟类根据D＝N/2LW计算种群密度，其中D为鸟类密度，N为种群数量，L为样线长度，W为样线单边宽度。鸟类数量等级划定依据相对多度，即1种鸟类的统计数量占所有被统计鸟类总个体数的百分比，相对多度≥10%的为优势种，1%~10%为常见种，＜1%为偶见种。
2. 结果
2.1 鸟类物种组成
2016−2018年调查到81种鸟，其中样线法调查到71种，红外相机调查到24种。通过汇总历史及本次调查记录，九龙山国家级自然保护区共记录鸟类165种，隶属15目49科(表2和表3)；其中，雀形目Passeriformes最多，共30科105种(63.64%)，其次为鹰形目Accipitriformes，1科13种(7.88%)，其余各目物种数均不超过10种。
表 2 九龙山国家级自然保护区鸟类名录Table 2 Species list of bird recorded in Jiulongshan National Nature Reserve序号 目 科 种 居留型 地理型 国家
保护
级别IUCN
红色
名录中国
红色
名录记录
类型2016−
2018历史 1 鸡形目
Galliformes雉科
Phasianidae白眉山鹧鸪Arborophila gingica 留鸟 东洋界 无 NT VU C + + 2 鹌鹑Coturnix japonica 冬候鸟 古北界 无 NT LC L + 3 灰胸竹鸡Bambusicola thoracicus 留鸟 东洋界 无 LC LC LC + + 4 黄腹角雉Tragopan caboti 留鸟 东洋界 Ⅰ VU EN LC + + 5 勺鸡Pucrasia macrolopha 留鸟 古北界 Ⅱ LC LC C + + 6 白鹇Lophura nycthemera 留鸟 东洋界 Ⅱ LC LC LC + + 7 白颈长尾雉Syrmaticus ellioti 留鸟 东洋界 Ⅰ NT VU C + + 8 环颈雉Phasianus colchicus 留鸟 古北界 无 LC LC L + + 9 雁形目
Anseriformes鸭科
Anatidae鸳鸯Aix galericulata 冬候鸟 古北界 Ⅱ LC NT L + 10 普通秋沙鸭Mergus merganser 冬候鸟 古北界 无 LC LC L + 11 鸽形目
Columbiformes鸠鸽科
Columbidae山斑鸠Streptopelia orientalis 留鸟 广布种 无 LC LC LC + 12 火斑鸠S. tranquebarica 留鸟 东洋界 无 LC LC L + 13 夜鹰目
Caprimulgiformes夜鹰科
Caprimulgidae普通夜鹰Caprimulgus indicus 夏候鸟 古北界 无 LC LC L + 14 雨燕科
Apodidae白腰雨燕Apus pacificus 夏候鸟 古北界 无 LC LC L + 15 鹃形目
Cuculiformes杜鹃科
Cuculidae大鹰鹃Hierococcyx sparverioides 夏候鸟 东洋界 无 LC LC L + 16 四声杜鹃Cuculus micropterus 夏候鸟 广布种 无 LC LC L + + 17 中杜鹃C. saturatus 夏候鸟 东洋界 无 LC LC L + 18 大杜鹃C. canorus 夏候鸟 广布种 无 LC LC L + 19 鹤形目
Gruiformes秧鸡科
Rallidae灰胸秧鸡Lewinia striata 夏候鸟 东洋界 无 LC LC L + 20 红脚田鸡Zapornia akool 留鸟 东洋界 无 LC LC L + 21 鸻形目
Charadriiformes鸻科
Charadriidae凤头麦鸡Vanellus vanellus 冬候鸟 古北界 无 NT LC L + 22 鹬科
Scolopacidae白腰杓鹬Numenius arquata 冬候鸟 古北界 无 NT NT L + 23 红脚鹬Tringa totanus 旅鸟 古北界 无 LC LC L + 24 鹈形目
Pelecaniformes鹭科
Ardeidae池鹭Ardeola bacchus 夏候鸟 东洋界 无 LC LC L + 25 中白鹭Ardea intermedia 夏候鸟 东洋界 无 LC LC L + 26 鹰形目
Accipitriformes鹰科
Accipitridae黑冠鹃隼Aviceda leuphotes 夏候鸟 东洋界 Ⅱ LC LC L + 27 蛇雕Spilornis cheela 留鸟 东洋界 Ⅱ LC NT L + 28 鹰雕Nisaetus nipalensis 留鸟 东洋界 Ⅱ LC NT L + 29 乌雕Clanga clanga 冬候鸟 古北界 Ⅱ VU EN L + 30 白腹隼雕Aquila fasciata 留鸟 东洋界 Ⅱ LC VU L + 31 赤腹鹰Accipiter soloensis 留鸟 广布种 Ⅱ LC LC L + 32 松雀鹰A. virgatus 留鸟 古北界 Ⅱ LC LC C + + 33 雀鹰A. nisus 冬候鸟 古北界 Ⅱ LC LC L + 34 苍鹰A. gentilis 冬候鸟 古北界 Ⅱ LC NT L + 35 鹰形目
Accipitriformes鹰科
Accipitridae黑鸢Milvus migrans 留鸟 古北界 Ⅱ LC LC L + 36 灰脸鵟鹰Butastur indicus 冬候鸟 古北界 Ⅱ LC NT L + 37 毛脚鵟Buteo lagopus 冬候鸟 古北界 Ⅱ LC NT L + 38 普通鵟B. japonicus 冬候鸟 古北界 Ⅱ LC LC L + 39 鸮形目
Strigiformes鸱鸮科
Strigidae领角鸮Otus lettia 留鸟 东洋界 Ⅱ LC LC L + 40 红角鸮O. sunia 留鸟 东洋界 Ⅱ LC LC L + 41 雕鸮Bubo bubo 留鸟 东洋界 Ⅱ LC NT L + 42 领鸺鹠Glaucidium brodiei 留鸟 东洋界 Ⅱ LC LC L + 43 斑头鸺鹠G. cuculoides 留鸟 东洋界 Ⅱ LC LC L + 44 长耳鸮Asio otus 冬候鸟 古北界 Ⅱ LC LC L + 45 草鸮科
Tytonidae草鸮Tyto longimembris 留鸟 东洋界 Ⅱ LC DD L + 46 犀鸟目
Falconiformes戴胜科
Upupidae戴胜Upupa epops 旅鸟 广布种 无 LC LC L + 47 佛法僧目
Coraciformes佛法僧科
Coraciidae三宝鸟Eurystomus orientalis 夏候鸟 东洋界 无 LC LC L + 48 白胸翡翠Halcyon smyrnensis 留鸟 东洋界 无 LC LC L + 49 蓝翡翠H. pileata 夏候鸟 东洋界 无 LC LC L + 50 普通翠鸟Alcedo atthis 留鸟 广布种 无 LC LC L + 51 冠鱼狗Megaceryle lugubris 留鸟 东洋界 无 LC LC L + 52 啄木鸟目
Piciformes拟啄木鸟科
Capitonidae大拟啄木鸟Psilopogon virens 留鸟 东洋界 无 LC LC L + 53 啄木鸟科
Picidae斑姬啄木鸟Picumnus innominatus 留鸟 东洋界 无 LC LC L + 54 棕腹啄木鸟Dendrocopos hyperythrus 夏候鸟 古北界 无 LC LC L + 55 星头啄木鸟D. canicapillus 留鸟 广布种 无 LC LC L + 56 大斑啄木鸟D. major 留鸟 东洋界 无 LC LC L + 57 灰头绿啄木鸟Picus canus 留鸟 广布种 无 LC LC C + + 58 黄嘴栗啄木鸟Blythipicus pyrrhotis 留鸟 东洋界 无 LC LC LC + 59 隼形目
Falconiformes隼科
Falconidae红隼Falco tinnunculus 留鸟 广布种 Ⅱ LC LC L + 60 燕隼F. subbuteo 夏候鸟 东洋界 Ⅱ LC LC L + 61 雀形目
Passeriformes八色鸫科
Pittidae蓝翅八色鸫Pitta moluccensis 迷鸟 东洋界 Ⅱ LC DD L + 62 黄鹂科
Oriolidae黑枕黄鹂Oriolus chinensis 夏候鸟 东洋界 无 LC LC L + 63 莺雀科
Vireonidae淡绿鵙鹛Pteruthius xanthochlorus 留鸟 东洋界 无 LC NT L + 64 山椒鸟科
Campephagidae小灰山椒鸟Pericrocotus cantonensis 夏候鸟 古北界 无 LC LC L + 65 灰喉山椒鸟P. solaris 留鸟 东洋界 无 LC LC L + 66 卷尾科
Dicruridae灰卷尾Dicrurus leucophaeus 夏候鸟 东洋界 无 LC LC L + 67 发冠卷尾D. hottentottus 夏候鸟 东洋界 无 LC LC L + 68 伯劳科
Laniidae牛头伯劳Lanius bucephalus 冬候鸟 古北界 无 LC LC L + 69 红尾伯劳L. cristatus 夏候鸟 古北界 无 LC LC L + 70 棕背伯劳L. schach 留鸟 东洋界 无 LC LC L + 71 鸦科
Corvidae松鸦Garrulus glandarius 留鸟 古北界 无 LC LC LC + + 72 红嘴蓝鹊Urocissa erythrorhyncha 留鸟 东洋界 无 LC LC LC + + 73 灰树鹊Dendrocitta formosae 留鸟 东洋界 无 LC LC LC + + 74 雀形目
Passeriformes鸦科
Corvidae喜鹊Pica pica 留鸟 古北界 无 LC LC L + 75 白颈鸦Corvus pectoralis 留鸟 广布种 无 VU NT L + 76 大嘴乌鸦C. macrorhynchos 留鸟 广布种 无 LC LC L + 77 山雀科
Paridae煤山雀Periparus ater 留鸟 东洋界 无 LC LC L + 78 黄腹山雀Pardaliparus venustulus 留鸟 东洋界 无 LC LC L + + 79 大山雀Parus cinereus 留鸟 广布种 无 LC LC L + + 80 黄颊山雀Machlolophus spilonotus 留鸟 东洋界 无 LC LC L + + 81 扇尾莺科
Cisticolidae褐山鹪莺Prinia polychroa 迷鸟 东洋界 无 LC LC L + 82 纯色山鹪莺P. inornata 留鸟 东洋界 无 LC LC L + 83 燕科
Hirundinidae崖沙燕Riparia riparia 留鸟 古北界 无 LC LC L + 84 家燕Hirundo rustica 夏候鸟 古北界 无 LC LC L + 85 金腰燕Cecropis daurica 夏候鸟 广布种 无 LC LC L + 86 鹎科
Pycnonotidae领雀嘴鹎Spizixos semitorques 留鸟 东洋界 无 LC LC L + + 87 黄臀鹎Pycnonotus xanthorrhous 留鸟 东洋界 无 LC LC L + + 88 白头鹎P. sinensis 留鸟 东洋界 无 LC LC L + + 89 绿翅短脚鹎Ixos mcclellandii 留鸟 东洋界 无 LC LC L + + 90 栗背短脚鹎Hemixos castanonotus 留鸟 东洋界 无 LC LC L + + 91 黑短脚鹎H. leucocephalus 夏候鸟 东洋界 无 LC LC L + + 92 柳莺科
Phylloscopidae褐柳莺Phylloscopus fuscatus 旅鸟 古北界 无 LC LC L + 93 巨嘴柳莺P. schwarzi 旅鸟 古北界 无 LC LC L + + 94 黄腰柳莺P. proregulus 冬候鸟 古北界 无 LC LC L + + 95 黄眉柳莺P. inornatus 旅鸟 古北界 无 LC LC L + + 96 极北柳莺P. borealis 旅鸟 古北界 无 LC LC L + 97 冕柳莺P. coronatus 旅鸟 古北界 无 LC LC L + 98 冠纹柳莺P. claudiae 夏候鸟 东洋界 无 LC LC L + 99 黄胸柳莺P. cantator 迷鸟 东洋界 无 LC LC L + 100 金眶鹟莺Seicercus burkii 迷鸟 东洋界 无 LC LC L + 101 栗头鹟莺S. castaniceps 夏候鸟 东洋界 无 LC LC L + 102 树莺科
Cettiidae棕脸鹟莺Abroscopus albogularis 留鸟 东洋界 无 LC LC L + + 103 强脚树莺Horornis fortipes 留鸟 东洋界 无 LC LC L + + 104 长尾山雀科
Aegithalidae红头长尾山雀Aegithalos concinnus 留鸟 东洋界 无 LC LC L + + 105 莺鹛科
Sylviidae棕头鸦雀Sinosuthora webbianus 留鸟 东洋界 无 LC LC L + + 106 绣眼鸟科
Zosteropidae栗耳凤鹛Yuhina castaniceps 留鸟 东洋界 无 LC LC L + 107 暗绿绣眼鸟Zosterops japonicus 留鸟 东洋界 无 LC LC L + + 108 林鹛科
Timaliidae斑胸钩嘴鹛Erythrogenys gravivox 留鸟 东洋界 无 LC LC L + 109 棕颈钩嘴鹛Pomatorhinus ruficollis 留鸟 东洋界 无 LC LC LC + + 110 红头穗鹛Cyanoderma ruficeps 留鸟 东洋界 无 LC LC L + + 111 幽鹛科
Pellorneidae灰眶雀鹛Alcippe morrisonia 留鸟 东洋界 无 LC LC LC + + 112 噪鹛科
Leiothrichidae画眉Garrulax canorus 留鸟 东洋界 无 LC NT LC + + 113 灰翅噪鹛G. cineraceus 留鸟 东洋界 无 LC LC C + 114 黑脸噪鹛G. perspicillatus 留鸟 东洋界 无 LC LC L + + 115 雀形目
Passeriformes噪鹛科
Leiothrichidae小黑领噪鹛G. monileger 留鸟 东洋界 无 LC LC C + + 116 黑领噪鹛G. pectoralis 留鸟 东洋界 无 LC LC LC + + 117 棕噪鹛G. berthemyi 留鸟 东洋界 无 LC LC L + + 118 白颊噪鹛G. sannio 留鸟 东洋界 无 LC LC L + + 119 红嘴相思鸟Leiothrix lutea 留鸟 东洋界 无 LC LC L + + 120 䴓科
Sittidae普通䴓Sitta europaea 留鸟 古北界 无 LC LC L + 121 河乌科
Cinclidae褐河乌Cinclus pallasii 留鸟 广布种 无 LC LC L + + 122 椋鸟科
Sturnidae八哥Acridotheres cristatellus 留鸟 东洋界 无 LC LC L + 123 鸫科
Turdidae白眉地鸫Geokichla sibirica 旅鸟 东洋界 无 LC LC C + 124 虎斑地鸫Zoothera aurea 冬候鸟 古北界 无 LC LC C + + 125 灰背鸫Turdus hortulorum 冬候鸟 古北界 无 LC LC L + 126 乌鸫T. mandarinus 留鸟 东洋界 无 LC LC LC + + 127 白腹鸫T. pallidus 冬候鸟 古北界 无 LC LC C + 128 红尾斑鸫T. naumanni 旅鸟 古北界 无 LC LC L + 129 鹟科
Muscicapidae红胁蓝尾鸲Tarsiger cyanurus 冬候鸟 古北界 无 LC LC LC + + 130 鹊鸲Copsychus saularis 留鸟 东洋界 无 LC LC L + 131 北红尾鸲Phoenicurus auroreus 冬候鸟 古北界 无 LC LC L + + 132 红尾水鸲Rhyacornis fuliginosa 留鸟 古北界 无 LC LC L + + 133 白顶溪鸲Chaimarrornis leucocephalus 夏候鸟 东洋界 无 LC LC L + 134 紫啸鸫Myophonus caeruleus 留鸟 东洋界 无 LC LC LC + + 135 小燕尾Enicurus scouleri 留鸟 古北界 无 LC LC L + + 136 黑背燕尾E. immaculatus 留鸟 东洋界 无 LC LC L + 137 灰背燕尾E. schistaceus 留鸟 东洋界 无 LC LC L + + 138 白额燕尾E. leschenaulti 留鸟 东洋界 无 LC LC L + 139 灰林䳭Saxicola jerdoni 留鸟 东洋界 无 LC LC L + 140 蓝头矶鸫Monticola cinclorhyncha 留鸟 古北界 无 LC LC L + 141 蓝矶鸫M. solitarius 留鸟 古北界 无 LC LC LC + 142 北灰鹟Muscicapa dauurica 旅鸟 古北界 无 LC LC L + 143 白眉姬鹟Ficedula zanthopygia 夏候鸟 古北界 无 LC LC L + 144 白腹蓝鹟Cyanoptila cyanomelana 旅鸟 古北界 无 LC LC L + 145 白腹暗蓝鹟C. cumatilis 旅鸟 古北界 无 LC LC L + 146 白喉林鹟Cyornis brunneatus 夏候鸟 东洋界 无 VU VU L + 147 叶鹎科
Chloropseidae橙腹叶鹎Chloropsis hardwickii 留鸟 东洋界 无 LC LC L + 148 梅花雀科
Estrildidae白腰文鸟Lonchura striata 留鸟 东洋界 无 LC LC L + + 149 梅花雀科
Estrildidae斑文鸟L. punctulata 留鸟 东洋界 无 LC LC L + + 150 雀科
Passeridae山麻雀Passer cinnamomeus 留鸟 东洋界 无 LC LC L + + 151 麻雀P. montanus 留鸟 广布种 无 LC LC L + + 152 鹡鸰科
Motacillidae山鹡鸰Dendronanthus indicus 夏候鸟 古北界 无 LC LC L + 153 黄鹡鸰Motacilla tschutschensis 旅鸟 古北界 无 LC LC L + 154 雀形目
Passeriformes鹡鸰科
Motacillidae白鹡鸰M. alba 留鸟 古北界 无 LC LC L + + 155 树鹨Anthus hodgsoni 冬候鸟 古北界 无 LC LC L + + 156 红喉鹨A. cervinus 冬候鸟 古北界 无 LC LC L + 157 燕雀科
Fringillidae锡嘴雀Coccothraustes coccothraustes 冬候鸟 古北界 无 LC LC L + 158 黑尾蜡嘴雀Eophona migratoria 冬候鸟 古北界 无 LC LC L + 159 金翅雀Chloris sinica 留鸟 广布种 无 LC LC L + + 160 鹀科
Emberizidae凤头鹀Melophus lathami 留鸟 东洋界 无 LC LC L + 161 三道眉草鹀Emberiza cioides 留鸟 古北界 无 LC LC L + 162 白眉鹀E. tristrami 冬候鸟 古北界 无 LC NT L + + 163 小鹀E. pusilla 冬候鸟 古北界 无 LC LC L + + 164 田鹀E. rustica 冬候鸟 古北界 无 VU LC L + 165 灰头鹀E. spodocephala 冬候鸟 古北界 无 LC LC L + + 说明：LC表示低危；NT表示近危；VU表示易危；EN表示濒危；DD表示数据缺乏。L表示样线法观察；C表示红外相机监测。+表 示调查到此鸟 表 3 九龙山国家级自然保护区鸟类组成与保护级别Table 3 Taxonomic composition and national protection category of birds in Jiulongshan National Nature Reserve目 科 种 国家保护级别/种 目 科 种 国家保护级别/种 I Ⅱ Ⅰ Ⅱ 鸡形目 1 8 2 2 雁形目 1 2 0 1 鸽形目 1 2 0 0 夜鹰目 2 2 0 0 鹃形目 1 4 0 0 鹤形目 1 2 0 0 鸻形目 2 3 0 0 鹈形目 1 2 0 0 鹰形目 1 13 0 13 鸮形目 2 7 0 7 犀鸟目 1 1 0 0 佛法僧目 2 5 0 0 啄木鸟目 2 7 0 0 隼形目 1 2 0 2 雀形目 30 105 0 1 合计 49 165 2 26 2.2 濒危保护物种
九龙山国家级自然保护区记录到的165种鸟中，有国家Ⅰ级重点保护鸟类2种，分别为雉科的白颈长尾雉和黄腹角雉；国家Ⅱ级重点保护鸟类26种，主要为鹰形目(13种)和鸮形目(7种)物种；鸡形目和隼形目各2种；雁形目和雀形目各1种(表3)。
被IUCN濒危物种红色名录列为易危(VU)的有5种；近危(NT)的有5种；其余155种为低危(LC)种。被中国濒危物种红色名录列为濒危(EN)的有2种，分别为黄腹角雉和乌雕；易危(VU)的有4种；近危(NT)的有12种；数据缺乏(DD)2种；其余145种为低危(LC)种。
2.3 区系组成与居留型
在居留型方面，留鸟最多，有93种，占九龙山国家级自然保护区鸟类总数的56.36%；夏候鸟28种，占比16.97%；冬候鸟27种，占比16.36%；旅鸟13种，占比7.88%；迷鸟4种，占比2.42%。在留鸟、夏候鸟、冬候鸟和旅鸟中，物种数最多的都是雀形目鸟类，分别为61种、14种、15种和11种，分别占留鸟、夏候鸟、冬候鸟和旅鸟物种数的65.59%、50.00%、55.56%和84.62%。
在地理型方面，东洋界种最多(89种)，占九龙山国家级自然保护区鸟类物种总数的53.94%；古北界种60种，占比36.36%；广布种16种，占比9.70%。东洋界种在留鸟和夏候鸟中占比最多，分别占72.04%和60.71%；古北界种在旅鸟和冬候鸟中占绝对优势，分别为84.62%和100%；记录到的本区域内121种繁殖鸟(即留鸟与夏候鸟之和)中，东洋界种最多，共84种，占69.42%。
所有鸟类和繁殖鸟类，均以东洋界种占优势，因此认为九龙山国家级自然保护区鸟类地理区系以东洋界为主体，兼有东洋界向古北界过渡性的特征，更偏向于华南区的区系。
2.4 鸟类密度和相对多度
样线法调查发现(表4)：2016−2018年，九龙山国家级自然保护区共调查到鸟类71种，优势种为灰眶雀鹛(相对多度为28.39%，种群密度为199.88只·km−2)和红头长尾山雀(相对多度为10.19%，种群密度为71.75只·km−2)。常见种20种，密度为7~70只·km−2，如栗背短脚鹎、大山雀、棕脸鹟莺、山麻雀、麻雀等。其余49种为偶见种，种群密度小于7只·km−2。
表 4 九龙山国家级自然保护区鸟类种群密度和相对多度(2016−2018年)Table 4 Population density and relative abundance of birds in Jiulongshan National Nature Reserve (2016−2018)种名 密度/(只·km−2) 百分比/% 优势度 种名 密度/(只·km−2) 百分比/% 优势度 灰眶雀鹛 199.88 28.39 +++ 红头长尾山雀 71.75 10.19 +++ 栗背短脚鹎 63.47 9.01 ++ 大山雀 46.13 6.55 ++ 棕脸鹟莺 24.05 3.42 ++ 山麻雀 19.71 2.80 ++ 麻雀 19.71 2.80 ++ 红嘴蓝鹊 18.14 2.58 ++ 绿翅短脚鹎 17.74 2.52 ++ 红头穗鹛 16.16 2.30 ++ 黑短脚鹎 14.98 2.13 ++ 领雀嘴鹎 14.59 2.07 ++ 棕头鸦雀 13.40 1.90 ++ 红尾水鸲 11.43 1.62 ++ 白额燕尾 9.86 1.40 ++ 白鹡鸰 9.86 1.40 ++ 棕颈钩嘴鹛 9.46 1.34 ++ 松鸦 9.07 1.29 ++ 灰喉山椒鸟 8.67 1.23 ++ 白鹇 7.88 1.12 ++ 锡嘴雀 7.88 1.12 ++ 画眉 7.49 1.06 ++ 白头鹎 6.70 0.95 + 灰背燕尾 5.52 0.78 + 小灰山椒鸟 5.52 0.78 + 灰树鹊 4.34 0.62 + 灰胸竹鸡 3.94 0.56 + 小燕尾 3.94 0.56 + 黑脸噪鹛 3.55 0.50 + 红嘴相思鸟 3.55 0.50 + 强脚树莺 3.55 0.50 + 北红尾鸲 3.15 0.45 + 红胁蓝尾鸲 3.15 0.45 + 黄颊山雀 2.37 0.34 + 黄腰柳莺 2.37 0.34 + 环颈雉 1.97 0.28 + 黄眉柳莺 1.97 0.28 + 棕噪鹛 1.97 0.28 + 白眉鹀 1.58 0.22 + 斑胸钩嘴鹛 1.58 0.22 + 冠纹柳莺 1.58 0.22 + 黄臀鹎 1.58 0.22 + 灰头鹀 1.58 0.22 + 斑文鸟 1.18 0.17 + 褐河乌 1.18 0.17 + 黄腹山雀 1.18 0.17 + 极北柳莺 1.18 0.17 + 树鹨 1.18 0.17 + 白腰文鸟 0.79 0.11 + 斑姬啄木鸟 0.79 0.11 + 橙腹叶鹎 0.79 0.11 + 大鹰鹃 0.79 0.11 + 黑领噪鹛 0.79 0.11 + 黄腹角雉 0.79 0.11 + 暗绿绣眼鸟 0.39 0.06 + 白颊噪鹛 0.39 0.06 + 大斑啄木鸟 0.39 0.06 + 红脚田鸡 0.39 0.06 + 红脚鹬 0.39 0.06 + 黄鹡鸰 0.39 0.06 + 黄嘴栗啄木鸟 0.39 0.06 + 金翅雀 0.39 0.06 + 巨嘴柳莺 0.39 0.06 + 冕柳莺 0.39 0.06 + 鹊鸲 0.39 0.06 + 四声杜鹃 0.39 0.06 + 乌鸫 0.39 0.06 + 小鹀 0.39 0.06 + 星头啄木鸟 0.39 0.06 + 紫啸鸫 0.39 0.06 + 棕腹啄木鸟 0.39 0.06 + 说明：+表示偶见种；++表示常见种；+++表示优势种 2.5 鸟类组成变化
对比历史记录，2016−2018年的鸟类监测活动记录到的81种鸟类中，有22种为九龙山国家级自然保护区新纪录到的鸟种，均为雀形目鸟类(表2)，其中19种为样线法记录到的鸟类，4种为红外相机记录到的鸟类；从地理型和居留型角度来看，新记录种中大多数为繁殖鸟类(夏候鸟和留鸟，18种)和东洋界种(13种)。
3. 讨论
浙江九龙山国家级自然保护区地形复杂，属中亚热带湿润季风气候，四季分明，雨水充沛，优良的生态环境使得这里的鸟类物种多样性十分丰富[2]。保护区面积仅55.25 km2，但鸟类物种数超过浙江省鸟类物种数的30%[8]；森林覆盖率高(98.8%)，山间多溪流而少大型湖泊，以雀形目鸟占优势(105种，63.64%)，如一些噪鹛科、鹟科、柳莺科、鹎科、鹀科在本地种类较多。样线调查数据显示：灰眶雀鹛和红头长尾山雀等2种喜欢集群生活的鸟类为本地优势种。
在中国动物地理的划分上，浙江省属于东洋界华中区的东部丘陵平原亚区，与古北界华北区黄淮平原亚区相毗邻[5]，省内鸟类组成兼具古北界与东洋界成分。九龙山国家级自然保护区位于浙江省西南部较低纬度带内，绝大部分鸟类组成为东洋界种(53.94%)和古北界种(36.36%)，由此认为九龙山国家级自然保护区鸟类组成具有东洋界和古北界相混杂和过渡的特征，且偏向于东洋界。研究发现：位于浙江省西北部较高纬度的天目山地区鸟类组成中，东洋界种(51.8%)占比略高于古北界种(44.04%)[9]；而位于九龙山南部、浙江省较低纬度的凤阳山鸟类组成中，东洋界种(63.5%)则远高于古北界种(24.3%)[10]。由此可见，随地理位置向华南区移动，鸟类群落中东洋界成分增加。
就居留型而言，九龙山国家级自然保护区鸟类中留鸟最多(93种)，占鸟类物种数的一半以上(56.36%)；夏候鸟(28种)和冬候鸟(27种)次之。除留鸟外，黑短脚鹎、三宝鸟、发冠卷尾等夏候鸟多在浙江以南的东洋界越冬而飞来此地繁殖；北红尾鸲、灰背鸫、苍鹰等冬候鸟多在古北区繁殖而飞来此地越冬。因此认为研究区鸟类组成中的夏候鸟主要是东洋界种(17种，60.71%)，冬候鸟主要是古北界种(27种，100.00%)。该区旅鸟大多为古北界种(11种，84.62%)，由此不难推测，该保护区是北灰鹟、褐柳莺、极北柳莺等旅鸟秋季由北向南或春季由南向北的迁徙途径地。
研究区共观察到国家级重点保护鸟类或中国和IUCN红色名录中的受胁种37种，占本区所有物种数的22.42%。近年来，利用红外相机监测鸟类(夜行性以及地栖性鸟类)的作用突出[11]，在监测对人类活动敏感或不易在样线法中发现或迅速隐秘踪影而难以辨别物种上尤其有用。2012−2013年4个月[1]和本次调查中利用红外相机监测到九龙山国家级自然保护区鸟类物种数共26种，占研究区鸟类物种总数的15.76%，包括6种雉科鸟类，7种近地面活动的鸫科鸟类，其中灰翅噪鹛、白眉地鸫、白腹鸫为红外相机单独监测到。由于红外相机可以连续24 h无干扰工作，能更全面记录区域内的物种，更真实估测雉类种群数量大小并探究其分布活动规律，因此结合红外相机监测法对黄腹角雉[12]、白颈长尾雉[13]等中国特有珍禽进行生态学研究，可为保护工作的实施拓宽思路。
4. 致谢
感谢浙江大学生命科学学院任鹏参与红外相机监测与物种鉴定工作；感谢曾頔、赵郁豪、李家琦、周浩楠、金挺浩等同学参与鸟类群落调查工作。
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图 2 2种枳椇属植物果梗代谢物分类
Figure 2 Metabolite classification of fruit pedicels in two Hovenia species
图 3 2种枳椇属植物果梗PCA得分图(A)和载荷图(B)
Figure 3 PCA score diagram (A) and loading diagram (B) of fruit pedicels in two Hovenia species
图 4 2种枳椇属植物果梗OPLS-DA图(A)、排序检验图(B)和S-plot图(C)
Figure 4 OPLS-DA score plot (A), ranked test plot (B) and S-plot (C) of fruit pedicels in two Hovenia species
图 5 2种枳椇属植物果梗差异代谢物火山图(A)、差异代谢物聚类热图(B)和差异代谢物散点图(C)
Figure 5 Differential metabolite volcano plot (A), differential metabolite clustering heat map (B) and differential metabolite scatter plot (C) of fruit pedicels in two Hovenia species
图 6 2种枳椇属植物果梗差异代谢物的富集通路气泡图
Figure 6 Enrichment pathway bubble diagram of fruit pedicels in two Hovenia species
图 7 2种枳椇属植物果梗代谢差异中苯丙烷类化合物、黄酮类化合物和异喹啉生物碱的生物合成通路及相对含量差异
Figure 7 Biosynthesis pathways and contents of phenylpropanoid, flavonoid and isoquinoline alkaloid in fruit pedicels from two Hovenia species
表 1 2种枳椇属植物果梗差异代谢物显著富集通路
Table 1. Metabolites significantly enriched pathways of fruit pedicels in two Hovenia species
通路 通路名称 富集的代谢物名称 Map00940 苯丙烷类化合物生物合成 咖啡酰奎宁酸、对香豆酸、芥子醛、芥子酸、咖啡酸、阿魏酸 Map00941 黄酮类化合物生物合成 咖啡酰奎宁酸、柚皮素查耳酮、柚皮素、3, 4, 2’, 4’, 6’-五羟基查耳酮-4’-O-葡萄糖苷、樱桃苷、
3, 4, 2’, 4’, 6’-五羟基查耳酮、3’, 4, 4’, 5, 7-五羟基黄烷、短叶松素、圣草酚、根皮苷、
白矢车菊素Map00950 异喹啉生物碱生物合成 甲基衡州乌药碱、N-甲基乌药碱、异波尔定碱、华青藤碱、乌药碱、原儿茶醛、
对香豆酸、番荔枝碱
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