银杏ISSR-PCR扩增反应体系的优化

曹福亮; 王国霞; 李广平; 花喆斌

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银杏ISSR-PCR扩增反应体系的优化

曹福亮 , 王国霞 , 李广平 , 花喆斌

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曹福亮, 王国霞, 李广平, 花喆斌. 银杏ISSR-PCR扩增反应体系的优化[J]. 浙江农林大学学报, 2008, 25(2): 186-190.

引用本文:

曹福亮, 王国霞, 李广平, 花喆斌. 银杏ISSR-PCR扩增反应体系的优化[J]. 浙江农林大学学报, 2008, 25(2): 186-190.

CAO Fu-liang, WANG Guo-xia, LI Guang-ping, HUA Zhe-bin. Optimizing the inter simple sequence repeat(ISSR) reaction system with Gingko biloba[J]. Journal of Zhejiang A&F University, 2008, 25(2): 186-190.

Citation:

CAO Fu-liang, WANG Guo-xia, LI Guang-ping, HUA Zhe-bin. Optimizing the inter simple sequence repeat(ISSR) reaction system with Gingko biloba[J]. Journal of Zhejiang A&F University, 2008, 25(2): 186-190.

银杏ISSR-PCR扩增反应体系的优化

1.
南京林业大学森林资源与环境学院, 江苏南京 210037

基金项目:

“十一五”国家科技支撑项目(2006BAD18B0301)

详细信息

作者简介: 曹福亮,教授,博士生导师,从事经济林等研究。E-mail:samcao@njfu.edu.cn

中图分类号: S718.46

Optimizing the inter simple sequence repeat(ISSR) reaction system with Gingko biloba

1.
College of Forest Resources and Environment, Nanjing Forestry University, Nanjing 210037, Jiangsu, China

摘要: 为了对影响银杏Gingko biloba简单序列重复区间扩增-聚合酶链式反应(ISSR-PCR)扩增反应体系的因素进行优化,采用ISSR-PCR扩增技术和UVP凝胶电泳成像技术对模板DNA浓度、Taq酶用量、引物用量、dNTP的用量以及退火温度等因素进行筛选和优化。筛选优化后的反应条件:Taq酶0.3 μg,2 μL 10×Buffer(含15 mmol·L-1MgCl2),模板DNA 40 ng,dNTP 0.2 mmol·L-1,引物0.5 μmol·L-1,Mg2+1.5 mmol·L-1。PCR扩增程序:94℃变性5 min,然后进行38个循环:94℃变性30 s,48~53℃(根据引物而定)退火30 s,72℃延伸1 min;最后72℃延伸10 min,4℃终止反应。上述反应条件可广泛应用于银杏的遗传多样性分析、遗传育种和转基因等方面的研究。
- 林木育种学 /
- 银杏 /
- ISSR-PCR /
- 反应体系
Abstract: To optimize the inter simple sequence repeat(ISSR) reaction conditions with Ginkgo biloba,the concentrations of template DNA,Taq DNA polymerase,primers,deoxyribonucleotide triphosphate(dNTP),along with annealing temperature and their influence on polymerase chain reaction(PCR) amplification were studied. The sample leaves were collected in 97 old ginkgo trees from more than 20 provinces in April and May,2006. Results showed that the optimum reaction conditions for ISSR-PCR of ginkgo were: 0.3 μg Taq DNA,2 μL 10×Taq buffer(including 15 mmol·L-1 MgCl2),40 ng template DNA,0.2 mmol·L-1 dNTP,0.5 μmol·L-1 primer,and 1.5 mmol·L-1 Mg2+ with a total volume of 20 μL. Amplification consisted of one cycle with initial denaturation at 94 ℃ for 5 min,followed by 38 cycles of 30 s at 94 ℃,30 s annealing at 48-53 ℃(depending on the primer used), 1 min at 72 ℃,and a final 10 min extension at 72 ℃. Afterward,the samples were maintained at 4 ℃.
- forest tree breeding /
- Gingko biloba /
- ISSR-PCR /
- reaction system

[1]	彭珠清, 范辉华, 刘宝, 刘燕, 李静. 无患子SRAP-PCR反应体系的优化 . 浙江农林大学学报, 2014, 31(2): 322-328. doi: 10.11833/j.issn.2095-0756.2014.02.024
[2]	田风光, 何颖飞, 段承俐. 七叶一枝花ISSR-PCR反应体系的建立 . 浙江农林大学学报, 2014, 31(6): 983-989. doi: 10.11833/j.issn.2095-0756.2014.06.023
[3]	周生财, 黄华宏, 童再康, 吴小林. 4种楠木AFLP反应体系优化建立 . 浙江农林大学学报, 2013, 30(5): 789-796. doi: 10.11833/j.issn.2095-0756.2013.05.024
[4]	武冲, 仲崇禄, 张勇, 姜清彬, 陈羽, 陈珍. 麻楝ISSR-PCR反应体系的建立及优化 . 浙江农林大学学报, 2013, 30(4): 620-626. doi: 10.11833/j.issn.2095-0756.2013.04.024
[5]	陈争, 姜小凤, 童再康. 光皮桦EST-SSR PCR反应体系的优化 . 浙江农林大学学报, 2012, 29(6): 960-965. doi: 10.11833/j.issn.2095-0756.2012.06.023
[6]	林二培, 马海泉, 樊民亮, 骆文坚, 黄华宏, 童再康. 百山祖冷杉SSR体系的建立及人工辅助授粉子代的初步鉴定 . 浙江农林大学学报, 2011, 28(2): 234-240. doi: 10.11833/j.issn.2095-0756.2011.02.010
[7]	王国霞, 曹福亮, 方炎明. 古银杏雄株花粉超微形态特征类型 . 浙江农林大学学报, 2010, 27(3): 474-477. doi: 10.11833/j.issn.2095-0756.2010.03.025
[8]	王红玲, 张珏, 教忠意, 隋德宗. 旱柳SRAP－PCR体系的建立与优化 . 浙江农林大学学报, 2010, 27(6): 945-949. doi: 10.11833/j.issn.2095-0756.2010.06.024
[9]	叶生月, 陈钢, 张慧, 刘建杰, 曾燕如, 吴慧敏. 香榧ISSR-PCR扩增条件的优化和引物筛选 . 浙江农林大学学报, 2010, 27(1): 87-92. doi: 10.11833/j.issn.2095-0756.2010.01.014
[10]	罗平源, 史继孔, 张万萍. 银杏雌花芽分化期间内源激素、碳水化合物和矿质营养的变化 . 浙江农林大学学报, 2006, 23(5): 532-537.
[11]	杨萍, 郑前剑, 赵明水, 汤定钦. 柳杉CAPS 遗传标记反应体系的优化 . 浙江农林大学学报, 2006, 23(1): 52-55.
[12]	张文标, 金则新, 李钧敏, 潘冠琼. 甜槠ISSR-PCR 反应体系的正交优化 . 浙江农林大学学报, 2006, 23(5): 516-520.
[13]	王正加, 黄坚钦, 郭传友, 杨萍, 王华芳. 山核桃RAPD 反应体系的优化 . 浙江农林大学学报, 2003, 20(4): 429-433.
[14]	程晓建, 王白坡, 郑炳松, 方群, 陈金明. 银杏雌雄株性别鉴别研究进展 . 浙江农林大学学报, 2002, 19(2): 217-221.
[15]	黎章矩, 钱莲芳, 喻卫武. 银杏嫁接技术研究 . 浙江农林大学学报, 2002, 19(3): 235-239.
[16]	徐卫南, 周聘, 郎崇伟. 低产银杏树丰产技术 . 浙江农林大学学报, 2000, 17(2): 219-221.
[17]	王白坡, 程晓建, 戴文圣, 杨飞峰. 银杏雌雄株内源激素和核酸的变化 . 浙江农林大学学报, 1999, 16(2): 114-118.
[18]	康志雄, 陈顺伟, 金民赞, 许以强, 王侠剑, 朱志明, 张汝忠. 叶用银杏不同施肥处理效应 . 浙江农林大学学报, 1999, 16(3): 265-269.
[19]	朱玉球, 张国泉. 国内银杏文献分析 . 浙江农林大学学报, 1997, 14(4): 419-423.
[20]	钱莲芳, 黎章矩, 池方河, 倪丽芬, 王文潮. 银杏硬枝扦插与器官发生 . 浙江农林大学学报, 1993, 10(2): 125-132.

链接本文:
https://zlxb.zafu.edu.cn/article/id/2874

https://zlxb.zafu.edu.cn/article/zjnldxxb/2008/2/186

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银杏ISSR-PCR扩增反应体系的优化

1. 南京林业大学森林资源与环境学院, 江苏南京 210037

基金项目:

“十一五”国家科技支撑项目(2006BAD18B0301)

作者简介:
曹福亮,教授,博士生导师,从事经济林等研究。E-mail:samcao@njfu.edu.cn

收稿日期: 2007-02-01
修回日期: 2007-11-09
刊出日期: 2008-04-10

中图分类号: S718.46

关键词:

摘要: 为了对影响银杏Gingko biloba简单序列重复区间扩增-聚合酶链式反应(ISSR-PCR)扩增反应体系的因素进行优化,采用ISSR-PCR扩增技术和UVP凝胶电泳成像技术对模板DNA浓度、Taq酶用量、引物用量、dNTP的用量以及退火温度等因素进行筛选和优化。筛选优化后的反应条件:Taq酶0.3 μg,2 μL 10×Buffer(含15 mmol·L-1MgCl2),模板DNA 40 ng,dNTP 0.2 mmol·L-1,引物0.5 μmol·L-1,Mg2+1.5 mmol·L-1。PCR扩增程序:94℃变性5 min,然后进行38个循环:94℃变性30 s,48~53℃(根据引物而定)退火30 s,72℃延伸1 min;最后72℃延伸10 min,4℃终止反应。上述反应条件可广泛应用于银杏的遗传多样性分析、遗传育种和转基因等方面的研究。